Castration-resistant prostate cancer cells exhibit continued androgen receptor signaling in spite of low levels of ligand. Current therapies to block androgen receptor signaling act by inhibiting ligand production or binding. We developed bispecific antibodies capable of penetrating cells and binding androgen receptor outside of the ligand-binding domain. Half of the bispecific antibody molecule consists of a single-chain variable fragment of 3E10, an anti-DNA antibody that enters cells. The other half is a single-chain variable fragment version of AR441, an anti-AR antibody. The resulting 3E10-AR441 bispecific antibody enters human LNCaP prostate cells and accumulates in the nucleus. The antibody binds to wild-type, mutant and splice variant androgen receptor. Binding affinity of 3E10-AR441 to androgen receptor (284 nM) was lower than that of the parental AR441 mAb (4.6 nM), but could be improved (45 nM) through alternative placement of the affinity tags, and ordering of the VH and VK domains. The 3E10-AR441 bispecific antibody blocked genomic signaling by wild-type or splice variant androgen receptor in LNCaP cells. It also blocked non-genomic signaling by the wild-type receptor. Furthermore, bispecific antibody inhibited the growth of C4-2 prostate cancer cells under androgen-stimulated conditions. The 3E10-AR441 biAb can enter prostate cancer cells and inhibits androgen receptor function in a ligand-independent manner. It may be an attractive prototype agent for prostate cancer therapy.

中文翻译：

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针对前列腺癌治疗的靶向雄激素受体N端结构域的穿透细胞的双特异性抗体的开发。

尽管配体水平低，但去势抵抗性前列腺癌细胞仍表现出持续的雄激素受体信号传导。当前阻断雄激素受体信号传导的疗法通过抑制配体产生或结合而起作用。我们开发了双特异性抗体，能够穿透细胞并与配体结合域外部的雄激素受体结合。双特异性抗体分子的一半由3E10的单链可变片段组成，3E10是进入细胞的抗DNA抗体。另一半是抗AR抗体AR441的单链可变片段。所得的3E10-AR441双特异性抗体进入人LNCaP前列腺细胞并积聚在细胞核中。该抗体与野生型，突变和剪接变体雄激素受体结合。3E10-AR441与雄激素受体的结合亲和力（284 nM）低于亲代AR441 mAb的结合亲和力（4.6 nM），但可以通过亲和标签的替代性放置以及VH和VK的排序而提高（45 nM）域。3E10-AR441双特异性抗体通过LNCaP细胞中的野生型或剪接变体雄激素受体阻断基因组信号传导。它也阻断了野生型受体的非基因组信号传导。此外，双特异性抗体在雄激素刺激的条件下抑制了C4-2前列腺癌细胞的生长。3E10-AR441 biAb可以进入前列腺癌细胞并以不依赖配体的方式抑制雄激素受体的功能。它可能是用于前列腺癌治疗的有吸引力的原型药物。和VH和VK域的顺序。3E10-AR441双特异性抗体通过LNCaP细胞中的野生型或剪接变体雄激素受体阻断基因组信号传导。它也阻断了野生型受体的非基因组信号传导。此外，双特异性抗体在雄激素刺激的条件下抑制了C4-2前列腺癌细胞的生长。3E10-AR441 biAb可以进入前列腺癌细胞并以不依赖配体的方式抑制雄激素受体的功能。它可能是用于前列腺癌治疗的有吸引力的原型药物。和VH和VK域的顺序。3E10-AR441双特异性抗体通过LNCaP细胞中的野生型或剪接变体雄激素受体阻断基因组信号传导。它也阻断了野生型受体的非基因组信号传导。此外，双特异性抗体在雄激素刺激的条件下抑制了C4-2前列腺癌细胞的生长。3E10-AR441 biAb可以进入前列腺癌细胞并以不依赖配体的方式抑制雄激素受体的功能。它可能是用于前列腺癌治疗的有吸引力的原型药物。双特异性抗体在雄激素刺激的条件下抑制C4-2前列腺癌细胞的生长。3E10-AR441 biAb可以进入前列腺癌细胞并以不依赖配体的方式抑制雄激素受体的功能。它可能是用于前列腺癌治疗的有吸引力的原型药物。双特异性抗体在雄激素刺激的条件下抑制C4-2前列腺癌细胞的生长。3E10-AR441 biAb可以进入前列腺癌细胞并以不依赖配体的方式抑制雄激素受体的功能。它可能是用于前列腺癌治疗的有吸引力的原型药物。