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α2–6-Neosialidase: A Sialyltransferase Mutant as a Sialyl Linkage-Specific Sialidase
ACS Chemical Biology ( IF 3.5 ) Pub Date : 2018-03-15 00:00:00 , DOI: 10.1021/acschembio.8b00002 John B. McArthur 1 , Hai Yu 1 , Nova Tasnima 1 , Christie M. Lee 1 , Andrew J. Fisher 1, 2 , Xi Chen 1
ACS Chemical Biology ( IF 3.5 ) Pub Date : 2018-03-15 00:00:00 , DOI: 10.1021/acschembio.8b00002 John B. McArthur 1 , Hai Yu 1 , Nova Tasnima 1 , Christie M. Lee 1 , Andrew J. Fisher 1, 2 , Xi Chen 1
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The lack of α2–6-linkage specific sialidases limits the structural and functional studies of sialic-acid-containing molecules. Photobacterium damselae α2–6-sialyltransferase (Pd2,6ST) was shown previously to have α2–6-specific, but weak, sialidase activity. Here, we develop a high-throughput blue-white colony screening method to identify Pd2,6ST mutants with improved α2–6-sialidase activity from mutant libraries generated by sequential saturation mutagenesis. A triple mutant (Pd2,6ST S232L/T356S/W361F) has been identified with 100-fold improved activity, high α2–6-sialyl linkage selectivity, and ability to cleave two common sialic acid forms, N-acetylneuraminic acid (Neu5Ac) and N-glycolylneuraminic acid (Neu5Gc). It is a valuable tool for sialoglycan structural analysis and functional characterization. The sequential saturation mutagenesis and screening strategy developed here can be explored to evolve other linkage-specific neoglycosidases from the corresponding glycosyltransferases.
中文翻译：
α2–6-新唾液酸化酶：作为唾液酸键特异性唾液酸化酶的唾液酸转移酶突变体
缺乏α2–6连锁的唾液酸酶限制了含唾液酸分子的结构和功能研究。先前显示的damselae光细菌α2–6-唾液酸转移酶（Pd2,6ST）具有α2–6特异性，但唾液酸酶活性较弱。在这里，我们开发了一种高通量蓝白色菌落筛选方法，可以从通过顺序饱和诱变产生的突变体文库中鉴定具有提高的α2–6-唾液酸酶活性的Pd2,6ST突变体。已鉴定出一个三重突变体（Pd2,6ST S232L / T356S / W361F），其活性提高了100倍，具有较高的α2–6-唾液酸键选择性，并具有裂解两种常见唾液酸形式的能力，即N-乙酰神经氨酸（Neu5Ac）和ñ-甘氨酰神经氨酸（Neu5Gc）。它是用于唾液酸聚糖结构分析和功能表征的有价值的工具。可以探索此处开发的顺序饱和诱变和筛选策略，以从相应的糖基转移酶进化出其他连锁特异性新糖苷酶。
更新日期：2018-03-15
中文翻译：
α2–6-新唾液酸化酶：作为唾液酸键特异性唾液酸化酶的唾液酸转移酶突变体
缺乏α2–6连锁的唾液酸酶限制了含唾液酸分子的结构和功能研究。先前显示的damselae光细菌α2–6-唾液酸转移酶（Pd2,6ST）具有α2–6特异性，但唾液酸酶活性较弱。在这里，我们开发了一种高通量蓝白色菌落筛选方法，可以从通过顺序饱和诱变产生的突变体文库中鉴定具有提高的α2–6-唾液酸酶活性的Pd2,6ST突变体。已鉴定出一个三重突变体（Pd2,6ST S232L / T356S / W361F），其活性提高了100倍，具有较高的α2–6-唾液酸键选择性，并具有裂解两种常见唾液酸形式的能力，即N-乙酰神经氨酸（Neu5Ac）和ñ-甘氨酰神经氨酸（Neu5Gc）。它是用于唾液酸聚糖结构分析和功能表征的有价值的工具。可以探索此处开发的顺序饱和诱变和筛选策略，以从相应的糖基转移酶进化出其他连锁特异性新糖苷酶。
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