Immune cells comprise a diverse and dynamic cell population that is responsible for a broad range of immunological activities. They act in concert with other immune and nonimmune cells via cytokine-mediated communication and direct cell-cell interactions. Understanding the complex immune network requires a broad characterization of its individual cellular components. This is especially relevant for the brain compartment, which is an active immunological site, composed of resident and infiltrating immune cells that affect brain development, tissue homeostasis and neuronal activity. Mass cytometry, or CyTOF (cytometry by time-of-flight), uses metal-conjugated antibodies to enable a high-dimensional description of tens of markers at the single-cell level, thereby providing a bird's-eye view of the immune system. This technique has been successfully applied to the discovery of novel immune populations in humans and rodents. Here, we provide a step-by-step description of a mass cytometry approach for the analysis of the mouse brain compartment. The different stages of the procedure include brain perfusion, extraction of the brain tissue and its dissociation into a single-cell suspension, followed by cell staining with metal-tagged antibodies, sample reading using a mass cytometer, and data analysis using SPADE and viSNE. This procedure takes <5 h (excluding data analysis) and can be applied to study modifications in the brain's immune populations under normal and pathological conditions.

中文翻译：

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大脑中免疫细胞的大量细胞计数分析。

免疫细胞包括负责广泛的免疫学活动的多样化和动态的细胞群。它们通过细胞因子介导的通讯和直接的细胞-细胞相互作用与其他免疫和非免疫细胞协同作用。了解复杂的免疫网络需要对其单个细胞成分进行广泛的表征。这与脑室特别相关，脑室是一个活跃的免疫部位，由影响大脑发育，组织稳态和神经元活动的常驻和浸润性免疫细胞组成。大规模细胞计数法或CyTOF（飞行时间细胞计数法）使用金属结合的抗体在单个细胞水平上对数十种标记物进行高维描述，从而提供免疫系统的鸟瞰图。该技术已成功应用于发现人类和啮齿类动物的新型免疫种群。在这里，我们提供了用于对小鼠脑室进行分析的细胞计数法的分步说明。该过程的不同阶段包括脑灌注，脑组织的提取及其解离成单细胞悬液，然后用金属标记的抗体对细胞进行染色，使用大容量细胞仪进行样品读取以及使用SPADE和viSNE进行数据分析。此过程耗时少于5小时（不包括数据分析），可用于研究正常和病理条件下大脑免疫种群的变化。我们提供了用于对小鼠脑室进行分析的细胞计数法的分步说明。该过程的不同阶段包括脑灌注，脑组织的提取及其解离成单细胞悬液，然后用金属标记的抗体对细胞进行染色，使用大容量细胞仪进行样品读取以及使用SPADE和viSNE进行数据分析。此过程耗时少于5小时（不包括数据分析），可用于研究正常和病理条件下大脑免疫种群的变化。我们提供了用于对小鼠脑室进行分析的细胞计数法的分步说明。该过程的不同阶段包括脑灌注，脑组织的提取及其解离成单细胞悬液，然后用金属标记的抗体对细胞进行染色，使用大容量细胞仪进行样品读取以及使用SPADE和viSNE进行数据分析。此过程耗时少于5小时（不包括数据分析），可用于研究正常和病理条件下大脑免疫种群的变化。使用SPADE和viSNE进行数据分析。此过程耗时少于5小时（不包括数据分析），可用于研究正常和病理条件下大脑免疫种群的变化。使用SPADE和viSNE进行数据分析。此过程耗时少于5小时（不包括数据分析），可用于研究正常和病理条件下大脑免疫种群的变化。