IMM-H004 is a novel neuroprotective agent and its glucuronide metabolite IMM-H004G has similar protective effects against cerebral ischemic injury in vivo and in vitro. A specific and sensitive ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry method was established and validated for determination of IMM-H004 and IMM-H004G simultaneously in rat plasma and Ringer's solution. Plasma samples containing IMM-H004, IMM-H004G and internal standard propranolol were prepared by direct protein precipitation in a sample-to-solvent ratio of 1:2:6 (plasma: water: acetonitrile), whereas no protein precipitation was required for Ringer's solution samples. Separation was performed with a gradient mobile phase of methanol/water with 0.5% formic acid (v/v) on Eclipse Plus C18 column (2.1 × 50 mm, 3.5 μm) at a flow rate of 0.3 mL/min. The detection was operated on a triple quadrupole mass spectrometer in positive ion multiple reaction monitoring (MRM) mode. The monitored transitions were 305.1 → 248.1 for IMM-H004, 481.3 → 305.1 for IMM-H004G and 260.1 → 183.1 for propranolol. The linear ranges of IMM-H004 and IMM-H004G were 5 to 3000 ng/mL and 10 to 3000 ng/mL for plasma method and 0.5 to 500 ng/mL for Ringer's solution method. All the intra-day and inter-day precision and accuracy for the two analytes in rat plasma were below 7.5% and the intra-day precision and accuracy for analytes in Ringer's solution were within ± 14.7%. There was no obvious matrix effect and the recoveries of the analytes were higher than 94.2%. IMM-H004 and IMM-H004G were stable during one analytic process. The established method was applied successfully to plasma pharmacokinetic and brain microdialysis studies of IMM-H004 and IMM-H004G in rats after a single intravenous administration of IMM-H004.

IMM-H004是一种新型的神经保护剂，其葡糖醛酸代谢产物IMM-H004G在体内和体外对脑缺血损伤具有相似的保护作用。建立了一种特异性灵敏的超高效液相色谱-串联质谱法，并验证了同时测定大鼠血浆和林格氏液中IMM-H004和IMM-H004G的有效性。通过直接蛋白质沉淀以样品与溶剂的比例为1：2：6（血浆：水：乙腈）制备含有IMM-H004，IMM-H004G和内标普萘洛尔的血浆样品，而林格氏液不需要进行蛋白质沉淀溶液样品。在Eclipse Plus C18色谱柱（2.1×50 mm，3.5μm）上，用甲醇/水与0.5％甲酸（v / v）的梯度流动相进行分离，流速为0.3 mL / min。该检测是在三重四极杆质谱仪上以正离子多反应监测（MRM）模式进行的。监视的转换为305.1→248。IMM-H004为1，IMM-H004G为481.3→305.1，普萘洛尔为260.1→183.1。对于血浆方法，IMM-H004和IMM-H004G的线性范围分别为5至3000 ng / mL和10至3000 ng / mL，对于林格氏溶液法，线性范围为0.5至500 ng / mL。大鼠血浆中两种分析物的日间和日间精度和准确度均低于7.5％，林格氏液中的分析物的日间精确度和准确度均在±14.7％之内。没有明显的基质效应，分析物的回收率高于94.2％。在一项分析过程中，IMM-H004和IMM-H004G稳定。所建立的方法已成功应用于大鼠单次静脉内注射IMM-H004的血浆药代动力学和脑微透析研究IMM-H004和IMM-H004G。普萘洛尔为1。对于血浆方法，IMM-H004和IMM-H004G的线性范围分别为5至3000 ng / mL和10至3000 ng / mL，对于林格氏溶液法，线性范围为0.5至500 ng / mL。大鼠血浆中两种分析物的日间和日间精度和准确度均低于7.5％，林格氏液中的分析物的日间精确度和准确度均在±14.7％之内。没有明显的基质效应，分析物的回收率高于94.2％。在一项分析过程中，IMM-H004和IMM-H004G稳定。所建立的方法已成功应用于大鼠单次静脉内注射IMM-H004后的血浆药代动力学和脑微透析研究IMM-H004和IMM-H004G。普萘洛尔为1。对于血浆方法，IMM-H004和IMM-H004G的线性范围分别为5至3000 ng / mL和10至3000 ng / mL，对于林格氏溶液法，线性范围为0.5至500 ng / mL。大鼠血浆中两种分析物的日间和日间精度和准确度均低于7.5％，林格氏液中的分析物的日间精确度和准确度均在±14.7％之内。没有明显的基质效应，分析物的回收率高于94.2％。在一项分析过程中，IMM-H004和IMM-H004G稳定。所建立的方法已成功应用于大鼠单次静脉内注射IMM-H004后的血浆药代动力学和脑微透析研究IMM-H004和IMM-H004G。林格氏溶液法为5至500 ng / mL。大鼠血浆中两种分析物的日间和日间精度和准确度均低于7.5％，林格氏液中的分析物的日间精确度和准确度均在±14.7％之内。没有明显的基质效应，分析物的回收率高于94.2％。在一项分析过程中，IMM-H004和IMM-H004G稳定。所建立的方法已成功应用于大鼠单次静脉内注射IMM-H004后的血浆药代动力学和脑微透析研究IMM-H004和IMM-H004G。林格氏溶液法为5至500 ng / mL。大鼠血浆中两种分析物的日间和日间精度和准确度均低于7.5％，林格氏液中的分析物的日间精确度和准确度均在±14.7％之内。没有明显的基质效应，分析物的回收率高于94.2％。在一项分析过程中，IMM-H004和IMM-H004G稳定。所建立的方法已成功应用于大鼠单次静脉内注射IMM-H004的血浆药代动力学和脑微透析研究IMM-H004和IMM-H004G。没有明显的基质效应，分析物的回收率高于94.2％。在一项分析过程中，IMM-H004和IMM-H004G稳定。所建立的方法已成功应用于大鼠单次静脉内注射IMM-H004后的血浆药代动力学和脑微透析研究IMM-H004和IMM-H004G。没有明显的基质效应，分析物的回收率高于94.2％。在一项分析过程中，IMM-H004和IMM-H004G稳定。所建立的方法已成功应用于大鼠单次静脉内注射IMM-H004后的血浆药代动力学和脑微透析研究IMM-H004和IMM-H004G。