Red blood cell lysis is an integral part of many flow cytometry protocols. It's potential to cause artifacts has been known for decades, but lysis free sample preparation has failed to replace lysis in most applications. Studies of various lysing protocols on cell losses and effects on phenotypic markers and cell function began early in the history of immunophenotyping and continue to this day. Opportunities to combine live cell response and functional assessment with phenotyping have sparked increasing interest in no lyse no wash protocols, with minimizing sample preparation effects on the cell biology as the primary goal. No lyse no wash protocols reduce sample handling and are procedurally less complex than lysis protocols, but the impact of keeping intact red blood cells that grossly outnumber the target white blood cells, must be understood to fully take advantage of this simplicity. Presented here are theories and methods for executing and interpreting no lyse no wash assays in whole blood. Methods for distinguishing white blood cells and platelets from red blood cells and improving scatter data by combining 405 nm and 488 nm side scatter are shown. Methods for assessing white blood cell light scattering profiles for individual instruments and sample treatments are discussed within the context of example profiles for no lysis and hypotonic and ammonium chloride lysis treatments. The utility of overcoming no lyse no wash scatter and fluorescence background limitations using alternate scatter and fluorescence thresholding strategies is also discussed in the context of application examples.

中文翻译：

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免裂解免洗涤流式细胞术可最大限度地减少样品制备

红细胞裂解是许多流式细胞术方案的组成部分。几十年来，人们都知道可能会导致伪影，但在大多数应用中，免裂解样品制备未能取代裂解。关于细胞损失和对表型标志物和细胞功能影响的各种裂解方案的研究始于免疫表型历史的早期，并一直持续到今天。将活细胞反应和功能评估与表型分析相结合的机会引发了对免裂解免洗涤方案越来越多的兴趣，将样品制备对细胞生物学的影响降至最低是主要目标。不裂解不洗涤方案减少了样品处理，并且在程序上不如裂解方案复杂，但保持完整的红细胞数量远远超过目标白细胞的影响，必须理解为充分利用这种简单性。这里介绍的是在全血中执行和解释免裂解免洗检测的理论和方法。显示了通过组合 405 nm 和 488 nm 侧向散射来区分白细胞和血小板与红细胞并改善散射数据的方法。用于评估单个仪器和样品处理的白细胞光散射曲线的方法在无裂解和低渗和氯化铵裂解处理的示例曲线的上下文中讨论。在应用示例的上下文中还讨论了使用交替散射和荧光阈值策略克服无裂解无洗涤散射和荧光背景限制的效用。这里介绍的是在全血中执行和解释免裂解免洗检测的理论和方法。显示了通过组合 405 nm 和 488 nm 侧向散射来区分白细胞和血小板与红细胞并改善散射数据的方法。用于评估单个仪器和样品处理的白细胞光散射曲线的方法在无裂解和低渗和氯化铵裂解处理的示例曲线的上下文中讨论。在应用示例的上下文中还讨论了使用交替散射和荧光阈值策略克服无裂解无洗涤散射和荧光背景限制的效用。这里介绍的是在全血中执行和解释免裂解免洗检测的理论和方法。显示了通过组合 405 nm 和 488 nm 侧向散射来区分白细胞和血小板与红细胞并改善散射数据的方法。用于评估单个仪器和样品处理的白细胞光散射曲线的方法在无裂解和低渗和氯化铵裂解处理的示例曲线的上下文中讨论。在应用示例的上下文中还讨论了使用交替散射和荧光阈值策略克服无裂解无洗涤散射和荧光背景限制的效用。显示了通过组合 405 nm 和 488 nm 侧向散射来区分白细胞和血小板与红细胞并改善散射数据的方法。用于评估单个仪器和样品处理的白细胞光散射曲线的方法在无裂解和低渗和氯化铵裂解处理的示例曲线的上下文中讨论。在应用示例的上下文中还讨论了使用交替散射和荧光阈值策略克服无裂解无洗涤散射和荧光背景限制的效用。显示了通过组合 405 nm 和 488 nm 侧向散射来区分白细胞和血小板与红细胞并改善散射数据的方法。用于评估单个仪器和样品处理的白细胞光散射曲线的方法在无裂解和低渗和氯化铵裂解处理的示例曲线的上下文中讨论。在应用示例的上下文中还讨论了使用交替散射和荧光阈值策略克服无裂解无洗涤散射和荧光背景限制的效用。用于评估单个仪器和样品处理的白细胞光散射曲线的方法在无裂解和低渗和氯化铵裂解处理的示例曲线的上下文中讨论。在应用示例的上下文中还讨论了使用交替散射和荧光阈值策略克服无裂解无洗涤散射和荧光背景限制的效用。用于评估单个仪器和样品处理的白细胞光散射曲线的方法在无裂解和低渗和氯化铵裂解处理的示例曲线的上下文中讨论。在应用示例的上下文中还讨论了使用交替散射和荧光阈值策略克服无裂解无洗涤散射和荧光背景限制的效用。