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In vitro and in vivo assessment of delivery of hydrophobic molecules and plasmid DNAs with PEO–PPO–PEO polymeric micelles on cornea
Journal of Food and Drug Analysis ( IF 2.6 ) Pub Date : 2018-04-01 , DOI: 10.1016/j.jfda.2017.09.002
Feichin Hsiao, Po-Yang Huang, Takao Aoyagi, Shwu-Fen Chang, Jiahorng Liaw

The stability and bio-distribution of genes or drug complexes with poly(ethylene oxide)-poly(propylene oxide)-poly(ethylene oxide) (PEO-PPO-PEO, Pluronic F-68) polymeric micelles (PM) are essential for an effective nanosized PM delivery system. We used Förster resonance energy transfer (FRET) pairs with PM and measured the FRET ratio to assess the stability of PM in vitro and in vivo on the cornea. The FRET ratio reached a plateau at 0.8 with 3% PM. Differential scanning calorimetry measurement confirmed the complex formation of FRET pairs with PM. Confocal imaging with the fluorophores fluorescein isothiocyanate isomer I (FITC) and rhodamine B base (RhB) also showed the occurrence of FRET pairs in vitro. The fluorophores were mixed with 3% PM solution or the FITC-labeled PEO-PPO-PEO polymers (FITC-P) were mixed with RhB-labeled plasmids (RhB-DNA). In addition, the in vitro corneal permeation of FRET pair complexes with PM reached a 0.8 FRET ratio. One hour after eye drop administration, FRET pairs colocalized in the cytoplasm, and surrounded and entered the nuclei of cells in the cornea, and the polymers were located in the corneal epithelial layers, as detected through anti-PEG immunohistochemistry. Furthermore, fluorescence colocalization in the cytoplasm and cell nucleus of the corneal epithelium was confirmed in tissues where RhB or RhB-DNA complexed with FITC-P was found to accumulate. We demonstrate that at a concentration of 3%, PM can encapsulate FRET pairs or RhB-DNA and retain their integrity within the cornea 1 h after administration, suggesting the feasibility and stability of PEO-PPO-PEO polymers as a vehicle for drug delivery.

中文翻译:

用 PEO-PPO-PEO 聚合物胶束在角膜上递送疏水分子和质粒 DNA 的体外和体内评估

具有聚(环氧乙烷)-聚(环氧丙烷)-聚(环氧乙烷)(PEO-PPO-PEO,Pluronic F-68)聚合物胶束(PM)的基因或药物复合物的稳定性和生物分布对于有效的纳米级 PM 输送系统。我们使用 Förster 共振能量转移 (FRET) 对与 PM 并测量 FRET 比率以评估 PM 在体外和体内对角膜的稳定性。FRET 比率在 3% PM 时达到 0.8 的平台期。差示扫描量热法测量证实了 FRET 对与 PM 的复杂形成。荧光团异硫氰酸荧光素异构体 I (FITC) 和罗丹明 B 碱基 (RhB) 的共聚焦成像也显示了体外 FRET 对的发生。将荧光团与 3% PM 溶液混合或将 FITC 标记的 PEO-PPO-PEO 聚合物 (FITC-P) 与 RhB 标记的质粒 (RhB-DNA) 混合。此外,FRET 对复合物与 PM 的体外角膜渗透达到了 0.8 FRET 比率。滴眼液给药1小时后,FRET对共定位于细胞质中,包围并进入角膜细胞核,通过抗PEG免疫组织化学检测,聚合物位于角膜上皮层。此外,在发现与 FITC-P 复合的 RhB 或 RhB-DNA 积聚的组织中,证实了角膜上皮细胞质和细胞核中的荧光共定位。我们证明,在 3% 的浓度下,PM 可以包裹 FRET 对或 RhB-DNA,并在给药后 1 小时在角膜内保持其完整性,这表明 PEO-PPO-PEO 聚合物作为药物输送载体的可行性和稳定性。FRET对复合物与PM的体外角膜渗透达到0.8 FRET比率。滴眼液给药1小时后,FRET对共定位于细胞质中,包围并进入角膜细胞核,通过抗PEG免疫组织化学检测,聚合物位于角膜上皮层。此外,在发现与 FITC-P 复合的 RhB 或 RhB-DNA 积聚的组织中,证实了角膜上皮细胞质和细胞核中的荧光共定位。我们证明,在 3% 的浓度下,PM 可以包裹 FRET 对或 RhB-DNA,并在给药后 1 小时在角膜内保持其完整性,这表明 PEO-PPO-PEO 聚合物作为药物输送载体的可行性和稳定性。FRET对复合物与PM的体外角膜渗透达到0.8 FRET比率。滴眼液给药1小时后,FRET对共定位于细胞质中,包围并进入角膜细胞核,通过抗PEG免疫组织化学检测,聚合物位于角膜上皮层。此外,在发现与 FITC-P 复合的 RhB 或 RhB-DNA 积聚的组织中,证实了角膜上皮细胞质和细胞核中的荧光共定位。我们证明,在 3% 的浓度下,PM 可以包裹 FRET 对或 RhB-DNA,并在给药后 1 小时在角膜内保持其完整性,这表明 PEO-PPO-PEO 聚合物作为药物输送载体的可行性和稳定性。滴眼液给药1小时后,FRET对共定位于细胞质中,包围并进入角膜细胞核,通过抗PEG免疫组织化学检测,聚合物位于角膜上皮层。此外,在发现与 FITC-P 复合的 RhB 或 RhB-DNA 积聚的组织中,证实了角膜上皮细胞质和细胞核中的荧光共定位。我们证明,在 3% 的浓度下,PM 可以包裹 FRET 对或 RhB-DNA,并在给药后 1 小时在角膜内保持其完整性,这表明 PEO-PPO-PEO 聚合物作为药物输送载体的可行性和稳定性。滴眼液给药1小时后,FRET对共定位于细胞质中,包围并进入角膜细胞核,通过抗PEG免疫组织化学检测,聚合物位于角膜上皮层。此外,在发现与 FITC-P 复合的 RhB 或 RhB-DNA 积聚的组织中,证实了角膜上皮细胞质和细胞核中的荧光共定位。我们证明,在 3% 的浓度下,PM 可以包裹 FRET 对或 RhB-DNA,并在给药后 1 小时在角膜内保持其完整性,这表明 PEO-PPO-PEO 聚合物作为药物输送载体的可行性和稳定性。并且聚合物位于角膜上皮层中,通过抗PEG免疫组织化学检测。此外,在发现与 FITC-P 复合的 RhB 或 RhB-DNA 积聚的组织中,证实了角膜上皮细胞质和细胞核中的荧光共定位。我们证明,在 3% 的浓度下,PM 可以包裹 FRET 对或 RhB-DNA,并在给药后 1 小时在角膜内保持其完整性,这表明 PEO-PPO-PEO 聚合物作为药物输送载体的可行性和稳定性。并且聚合物位于角膜上皮层中,通过抗PEG免疫组织化学检测。此外,在发现与 FITC-P 复合的 RhB 或 RhB-DNA 积聚的组织中,证实了角膜上皮细胞质和细胞核中的荧光共定位。我们证明,在 3% 的浓度下,PM 可以包裹 FRET 对或 RhB-DNA,并在给药后 1 小时在角膜内保持其完整性,这表明 PEO-PPO-PEO 聚合物作为药物输送载体的可行性和稳定性。
更新日期:2018-04-01
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