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Bisubstrate Kinetics of Glutathione S-Transferase: A Colorimetric Experiment for the Introductory Biochemistry Laboratory
Journal of Chemical Education ( IF 2.5 ) Pub Date : 2017-11-17 00:00:00 , DOI: 10.1021/acs.jchemed.7b00535 Lazaros Stefanidis 1 , Krystal V. Scinto 1 , Monica I. Strada 1 , Benjamin J. Alper 1
Journal of Chemical Education ( IF 2.5 ) Pub Date : 2017-11-17 00:00:00 , DOI: 10.1021/acs.jchemed.7b00535 Lazaros Stefanidis 1 , Krystal V. Scinto 1 , Monica I. Strada 1 , Benjamin J. Alper 1
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Most biochemical transformations involve more than one substrate. Bisubstrate enzymes catalyze multiple chemical reactions in living systems and include members of the transferase, oxidoreductase, and ligase enzyme classes. Working knowledge of bisubstrate enzyme kinetic models is thus of clear importance to the practicing biochemist. However, such models are infrequently explored in the undergraduate biochemistry laboratory. This deficiency suggests the need for well-defined, tractable, and economical methods for characterization of bisubstrate enzyme activity. The application of an established real-time colorimetric assay to investigate kinetic parameters of glutathione transfer by glutathione S-transferase is described. The reported method relies on commercially available materials and uses experimental conditions that are suited to application in the introductory biochemistry laboratory. Investigation of bisubstrate kinetic parameters was performed as part of a three-week laboratory experiment that emphasized protein extraction, purification, and characterization, leading to guided student development of bisubstrate enzyme kinetic models.
中文翻译：
谷胱甘肽S-转移酶的双底物动力学：入门生化实验室的比色实验。
大多数生化转化涉及不止一种底物。双底物酶催化生命系统中的多种化学反应，包括转移酶，氧化还原酶和连接酶类别的成员。因此，双底物酶动力学模型的工作知识对实践的生物化学家非常重要。但是，此类模型很少在本科生化学实验室中探索。这种缺陷表明需要一种定义明确，易于处理且经济的方法来表征双底物酶的活性。描述了建立的实时比色测定法在研究通过谷胱甘肽S-转移酶进行的谷胱甘肽转移动力学参数中的应用。报告的方法依赖于可商购的材料，并使用适合在生物化学入门实验室中应用的实验条件。作为为期三周的实验室实验的一部分，对双底物动力学参数进行了研究，该实验强调蛋白质的提取，纯化和表征，从而指导学生开发双底物酶动力学模型。
更新日期：2017-11-17
中文翻译：
谷胱甘肽S-转移酶的双底物动力学：入门生化实验室的比色实验。
大多数生化转化涉及不止一种底物。双底物酶催化生命系统中的多种化学反应，包括转移酶，氧化还原酶和连接酶类别的成员。因此，双底物酶动力学模型的工作知识对实践的生物化学家非常重要。但是，此类模型很少在本科生化学实验室中探索。这种缺陷表明需要一种定义明确，易于处理且经济的方法来表征双底物酶的活性。描述了建立的实时比色测定法在研究通过谷胱甘肽S-转移酶进行的谷胱甘肽转移动力学参数中的应用。报告的方法依赖于可商购的材料，并使用适合在生物化学入门实验室中应用的实验条件。作为为期三周的实验室实验的一部分，对双底物动力学参数进行了研究，该实验强调蛋白质的提取，纯化和表征，从而指导学生开发双底物酶动力学模型。
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