Hypotheses were tested that the proteome of pig kidney LLC-PK1 cells (i) contains Zn-proteins that react with a diversity of native and pharmacologically active metal-binding ligands to form ternary complexes and (ii) includes proteins that bind Zn2+ nonspecifically and together form ternary adducts with a variety of metal-binding agents. The method to observe ternary complex formation with Zn-proteins and proteome•Zn involved preformation of fluorescent TSQ [6-Methoxy-(8-p-toluenesulfonamido)quinoline]-Zn-proteins and/or proteome•Zn-TSQ adducts followed by competitive reaction with selected ligands. The loss of TSQ-dependent fluorescence signaled the replacement of TSQ by the competing ligand in the starting adducts. In vitro, 1,10-phenanthroline competed effectively with TSQ for binding to Zn-proteins in the proteome. The successful competition of 1,10-phenanthroline with TSQ-Zn-proteins was also observed in cells. Similarly, 1,10-phenanthroline was shown to bind to a sizable fraction of Zn2+ associated adventitiously with proteome (proteome•Zn). Other synthetic ligands that bind to Zn-proteins and proteome•Zn include 2,2-bipyridyl, 8-hydroxyquinoline, 2,2'-dicarboxypyridine, and pyrithione. Such results suggest that ligand binding to such sites may play a role in the observed biological effects of these and other metal-binding molecules. Although cysteine does not significantly compete with TSQ, glutathione displaces TSQ from Zn-proteins and proteome•Zn at concentrations well below those found in cells, implying that ternary complex formation involving glutathione may be physiologically significant.

中文翻译：

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锌运输：1,10-菲咯啉、谷胱甘肽和其他金属结合配体与蛋白质组 Zn2 形成加合物。

测试假设猪肾 LLC-PK1 细胞的蛋白质组 (i) 含有与多种天然和药理活性金属结合配体反应形成三元复合物的锌蛋白，以及 (ii) 包括非特异性结合 Zn2+ 的蛋白质与多种金属结合剂形成三元加合物。观察锌-蛋白质和蛋白质组三元复合物形成的方法•锌涉及荧光 TSQ [6-甲氧基-(8-对甲苯磺酰胺基)喹啉]-锌-蛋白质和/或蛋白质组•锌-TSQ 加合物的预形成，然后是竞争性加合物与选定的配体反应。TSQ 依赖性荧光的丢失表明 TSQ 被起始加合物中的竞争配体取代。在体外，1,10-菲咯啉与 TSQ 有效竞争以结合蛋白质组中的锌蛋白。在细胞中也观察到 1,10-菲咯啉与 TSQ-Zn-蛋白的成功竞争。类似地，1,10-菲咯啉显示可与相当大一部分与蛋白质组（蛋白质组•Zn）偶然相关的 Zn2+ 结合。其他与锌蛋白质和蛋白质组•Zn 结合的合成配体包括 2,2-联吡啶、8-羟基喹啉、2,2'-二羧基吡啶和吡啶硫酮。这些结果表明，与这些位点结合的配体可能在观察到的这些和其他金属结合分子的生物学效应中发挥作用。尽管半胱氨酸与 TSQ 没有显着竞争，但谷胱甘肽从 Zn-蛋白质和蛋白质组•Zn 中置换 TSQ 的浓度远低于细胞中发现的浓度，这意味着涉及谷胱甘肽的三元复合物形成可能具有生理意义。在细胞中也观察到具有 TSQ-Zn-蛋白的 10-菲咯啉。类似地，1,10-菲咯啉显示可与相当大一部分与蛋白质组（蛋白质组•Zn）偶然相关的 Zn2+ 结合。其他与锌蛋白质和蛋白质组•Zn 结合的合成配体包括 2,2-联吡啶、8-羟基喹啉、2,2'-二羧基吡啶和吡啶硫酮。这些结果表明，与这些位点结合的配体可能在观察到的这些和其他金属结合分子的生物学效应中发挥作用。尽管半胱氨酸与 TSQ 没有显着竞争，但谷胱甘肽从 Zn-蛋白质和蛋白质组•Zn 中置换 TSQ 的浓度远低于细胞中发现的浓度，这意味着涉及谷胱甘肽的三元复合物形成可能具有生理意义。在细胞中也观察到具有 TSQ-Zn-蛋白的 10-菲咯啉。类似地，1,10-菲咯啉显示可与相当大一部分与蛋白质组（蛋白质组•Zn）偶然相关的 Zn2+ 结合。其他与锌蛋白质和蛋白质组•Zn 结合的合成配体包括 2,2-联吡啶、8-羟基喹啉、2,2'-二羧基吡啶和吡啶硫酮。这些结果表明，与这些位点结合的配体可能在观察到的这些和其他金属结合分子的生物学效应中发挥作用。尽管半胱氨酸与 TSQ 没有显着竞争，但谷胱甘肽从 Zn-蛋白质和蛋白质组•Zn 中置换 TSQ 的浓度远低于细胞中发现的浓度，这意味着涉及谷胱甘肽的三元复合物形成可能具有生理意义。10-菲咯啉显示可与相当大一部分与蛋白质组（蛋白质组•Zn）偶然相关的 Zn2+ 结合。其他与锌蛋白质和蛋白质组•Zn 结合的合成配体包括 2,2-联吡啶、8-羟基喹啉、2,2'-二羧基吡啶和吡啶硫酮。这些结果表明，与这些位点结合的配体可能在观察到的这些和其他金属结合分子的生物学效应中发挥作用。尽管半胱氨酸与 TSQ 没有显着竞争，但谷胱甘肽从 Zn-蛋白质和蛋白质组•Zn 中置换 TSQ 的浓度远低于细胞中发现的浓度，这意味着涉及谷胱甘肽的三元复合物形成可能具有生理意义。10-菲咯啉显示可与相当大一部分与蛋白质组（蛋白质组•Zn）偶然相关的 Zn2+ 结合。其他与锌蛋白质和蛋白质组•Zn 结合的合成配体包括 2,2-联吡啶、8-羟基喹啉、2,2'-二羧基吡啶和吡啶硫酮。这些结果表明，与这些位点结合的配体可能在观察到的这些和其他金属结合分子的生物学效应中发挥作用。尽管半胱氨酸与 TSQ 没有显着竞争，但谷胱甘肽从 Zn-蛋白质和蛋白质组•Zn 中置换 TSQ 的浓度远低于细胞中发现的浓度，这意味着涉及谷胱甘肽的三元复合物形成可能具有生理意义。2'-二羧基吡啶和吡啶硫酮。这些结果表明，与这些位点结合的配体可能在观察到的这些和其他金属结合分子的生物学效应中发挥作用。尽管半胱氨酸与 TSQ 没有显着竞争，但谷胱甘肽从 Zn-蛋白质和蛋白质组•Zn 中置换 TSQ 的浓度远低于细胞中发现的浓度，这意味着涉及谷胱甘肽的三元复合物形成可能具有生理意义。2'-二羧基吡啶和吡啶硫酮。这些结果表明，与这些位点结合的配体可能在观察到的这些和其他金属结合分子的生物学效应中发挥作用。尽管半胱氨酸与 TSQ 没有显着竞争，但谷胱甘肽从 Zn-蛋白质和蛋白质组•Zn 中置换 TSQ 的浓度远低于细胞中发现的浓度，这意味着涉及谷胱甘肽的三元复合物形成可能具有生理意义。