DNA单碱基突变与多种疾病的发生密切相关,对尚处低丰度的单碱基突变进行灵敏检测对于疾病的早期诊断和精准治疗有重要意义。稳定错配碱基对(例如T:G和A:G错配)由于稳定性与匹配碱基对相近,给检测带来困难,导致已有的检测方法对于二者区分效果不佳。
北京大学化学与分子工程学院的赵美萍教授课题组研究发现了Lambda核酸外切酶与含有脱碱基位点的DNA荧光探针之间特殊的相互作用,并将之应用于区分稳定错配碱基对与匹配碱基对,实现了高灵敏检测低丰度单碱基突变。
当标记基团(F,记为0位)与脱碱基位点(□,记为-I位)同时存在时,Lambda核酸外切酶可以高效区分+I位的N:M碱基对匹配与否。经过优化,该方法对于匹配碱基对与稳定错配碱基对T:G和A:G的选择性区分因子分别达到447倍和238倍。目前,该方法已经实现了对JAK2 V617F(1849G>T)和KRAS codon 12(34G>C)两种与实际疾病直接相关的低丰度DNA单碱基突变检测,对于二者的突变链检测限分别为0.05%和0.02%。这一方法可在温和温度条件下(37 °C)快速得到结果(20 min),无需对温度进行精确控制,在临床诊断与基因相关研究中具有很大的应用潜力。
这一成果发表于《Chem. Commun.》上。
http://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/2015/cc/c5cc05749c#!divAbstract
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