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无结合热信号可能与缓冲液中的 Tris有关。Tris 缓冲液的焓变（ΔH）受温度影响大（ΔCp≈-450 cal/mol・K），若蛋白质与配体结合伴随显著的构象变化（导致 ΔCp 改变），会抵消结合热效应 。此外，若结合亲和力过低（Kd>10⁻⁴ M），或结合反应为熵驱动（ΔH≈0），也难以通过 ITC 检测。建议改用...

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FRET 效率为 0 可能与供体和受体的相对位置有关。CFP 和 YFP 作为 FRET 对，其有效距离需 < 10 nm，若融合蛋白的空间构象导致两者距离过远，或连接肽设计不合理，会阻碍能量转移 。此外，若 CFP 和 YFP 的表达比例失衡（如受体过量），会导致供体荧光被受体淬灭，但不产生有效 FRET 信号。建议...

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负值结果可能与柠檬酸盐缓冲液的 pH有关。脲酶的最适 pH 为 6.7-7.0，若缓冲液 pH 偏离此范围，会抑制酶活性 ；此外，土壤中若含有大量重金属离子（如 Cu²⁺、Hg²⁺），会与脲酶结合使其失活。建议重新校准缓冲液 pH，同时在显色前加入 EDTA（终浓度 10 mM）螯合金属离子；若土壤有机质含量高，可增加...

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RNAi 无效可能与dsRNA 的稳定性和摄取效率有关。果蝇肠道中的核酸酶会降解 dsRNA，若未添加核酸酶抑制剂（如肝素），dsRNA 在食物中很快失活 ；此外，500 bp 的 dsRNA 可能因二级结构复杂，难以被果蝇细胞摄取。建议在 dsRNA 溶液中添加 0.1% 肝素，或将 dsRNA 长度缩短至 200-...

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胚胎死亡可能与mRNA 溶液中的酚红有关。酚红作为 pH 指示剂，高浓度（>0.05%）会对胚胎产生毒性 ；此外，若 mRNA 溶液未充分纯化，残留的酶切缓冲液或盐离子也会影响胚胎存活。建议降低酚红浓度至 0.01%，mRNA 用 LiCl 沉淀法或柱纯化试剂盒去除杂质，注射前用 DEPC 水稀释至 50-80 ng/...

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峰型异常可能与甲醇纯度和复溶溶剂有关。分析纯甲醇含痕量有机酸，需用 LC-MS 级甲醇（经 0.1% 甲酸酸化）；复溶时乙腈 - 水比例不均会导致疏水相互作用差异 。此外，样品中残留的盐类（如肝素抗凝剂）会影响质谱离子化效率。建议用 LC-MS 级甲醇沉淀蛋白，复溶溶剂含 0.1% 甲酸，进样前用 10kDa 超滤管去...

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肝损伤不足可能与CCl₄的橄榄油稀释比例有关。40% CCl₄浓度过低，需提高至 50%-60%（v/v），且橄榄油需用分析纯（避免杂质中和 CCl₄） 。此外，C57BL/6 小鼠对 CCl₄敏感性低于 Balb/c 小鼠，可改用 Balb/c 或增加注射频率至每周 3 次。注射时需确保 CCl₄新鲜配制（超过 2 ...

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愈伤化可能与细胞分裂素（6-BA）浓度有关。6-BA 浓度过高会抑制芽分化，促进愈伤组织增殖 ；NAA 与 6-BA 的比例应维持在 1:4-1:6（NAA:6-BA）。建议降低 6-BA 至 1mg/L，增加 NAA 至 0.8mg/L，同时添加腺嘌呤（20mg/L）促进芽形成，分化阶段降低蔗糖浓度至 2%（原 3%...

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细胞球松散可能与Matrigel 浓度和温度有关。10% Matrigel 浓度过低，无法提供足够的三维支撑；接种时培养基温度过高（>20℃）会导致 Matrigel 提前凝固，分布不均 。此外，hMSC 在三维培养中需添加 BMP-2（50ng/mL）促进聚集。建议将 Matrigel 浓度提高至 20%，所有试剂预...

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梗死面积不足可能与戊巴比妥钠麻醉深度有关。戊巴比妥钠过量会抑制心肌收缩力，导致结扎后心肌缺血反应不典型；剂量不足则大鼠术中躁动，影响结扎精度 。此外，结扎丝线过细（如 6-0）或结扎力度不足，会导致左前降支不完全闭塞。建议用 30-40mg/kg 戊巴比妥钠麻醉（维持角膜反射迟钝），改用 5-0 丝线双重结扎，结扎后观...

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RNA 降解可能与DEPC（焦碳酸二乙酯） 缺失有关。DEPC 能灭活 RNase，若溶液和耗材未经过 DEPC 处理，残留的 RNase 会降解 RNA 。即使 TRIzol 能抑制部分 RNase，但组织裂解不充分时，内源性 RNase 仍会发挥作用。建议所有溶液用 0.1% DEPC 水配制（37℃过夜后高压灭菌...

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活细胞被误判为死细胞可能与台盼蓝浓度和染色时间有关。0.4% 台盼蓝浓度过高或染色超过 5 分钟，会使细胞膜受损的活细胞被染色 ；此外，消化时胰酶浓度过高（如 0.25% 未稀释）或消化时间过长（>5 分钟），会破坏细胞膜完整性，导致台盼蓝渗入。建议将台盼蓝稀释至 0.2%，染色时间控制在 2-3 分钟，消化时用 0....

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数据跳变可能与干燥剂（硅胶） 失效有关。硅胶吸水后从无色变粉色，失去干燥气体的能力，导致气路中水汽干扰红外传感器对 H₂O 的检测 。此外，气路中水汽凝结会堵塞微型流量计，导致流量不稳定。建议立即更换干燥的蓝色硅胶（吸水后变粉色需烘干再生），测定前用干燥空气冲洗气路 5 分钟，确保气路干燥通畅。阿拉丁硅胶系列：http...

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标准曲线异常可能与考马斯亮蓝 G-250 试剂的配制有关。该试剂含磷酸和乙醇，若磷酸浓度不足（低于 85%），会导致染料与蛋白结合不稳定 ；乙醇挥发后试剂黏度增加，也会影响显色均匀性。建议用 85% 磷酸准确配制试剂（考马斯亮蓝 G-250: 乙醇：磷酸：水 = 0.1g:50mL:10mL:40mL），配制后过滤杂质...

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突变率低可能与DMSO（二甲基亚砜） 浓度和 sgRNA 活性有关。DMSO 用于溶解 sgRNA 时，浓度过高（>5%）会对细胞产生毒性，降低转染后细胞存活率 ；若 sgRNA 在 DMSO 中溶解不充分或储存时反复冻融，会导致二级结构破坏，影响与 Cas9 的结合效率。建议将 DMSO 浓度控制在 1%-2%，溶解...

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吸光值为负可能与提取液成分和仪器设置有关。丙酮 - 乙醇混合液若含有杂质或纯度不足，会干扰吸光值测定 ；此外，若以提取液作为空白对照时，未充分扣除背景吸收，或仪器波长校准不准确，也会导致负数结果。建议使用高纯度的丙酮和乙醇配制提取液，确保比色皿无残留杂质；重新校准分光光度计波长，以提取液作为空白对照进行准确调零，必要时...

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生长缓慢可能与培养基成分和 ** 抗生素（如有添加）** 有关。LB 培养基中的蛋白胨、酵母提取物若质量不佳或营养成分不足，会限制细菌生长 ；若培养基中误加了抗生素（如氨苄青霉素残留），或抗生素浓度过高，会抑制大肠杆菌生长。此外，接种的菌种若保存时间过长、活力下降，也会影响生长速度。建议检查培养基原料质量，确保无抗生素...

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蛋白浓度下降和沉淀可能与透析缓冲液成分和透析时间有关。透析过程中，若缓冲液与蛋白质的离子强度、pH 差异过大，会导致蛋白质构象改变甚至沉淀 。例如，Tris - HCl 缓冲液 pH 波动或 NaCl 浓度变化可能影响蛋白稳定性；此外，透析时间过长会使蛋白质与透析袋材料发生非特异性结合，或因环境变化缓慢析出。建议确保透...

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显色不明显可能与TTC 溶液和磷酸缓冲液有关。TTC 在根系呼吸作用下被还原为红色的 TTF，若 TTC 溶液浓度过低或已部分氧化变质，会影响还原反应 ；磷酸缓冲液用于维持反应体系的 pH 稳定，pH 不适宜会降低根系中脱氢酶的活性，使 TTC 还原效率下降。建议检查 TTC 溶液的保存条件（需避光低温保存），重新配制...

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染色失败很可能与油红 O 染色液和分化步骤有关。油红 O 是一种脂溶性染料，用于特异性染色细胞内脂滴。若染色液配制时油红 O 未完全溶解，或使用的异丙醇浓度不准确，会影响染色效果 。此外，分化步骤中异丙醇浓度过高会过度洗脱脂滴上的染料，浓度过低则无法有效去除背景染色。建议确保油红 O 充分溶解在异丙醇中（可加热助溶后冷...