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The optimization system for preparation of TG1 competent cells and electrotransformation.
MicrobiologyOpen ( IF 3.9 ) Pub Date : 2020-05-11 , DOI: 10.1002/mbo3.1043 Dafei Chai 1 , Gang Wang 1 , Lin Fang 1 , Huizhong Li 1 , Shanshan Liu 1 , Haiying Zhu 1 , Junnian Zheng 1, 2
MicrobiologyOpen ( IF 3.9 ) Pub Date : 2020-05-11 , DOI: 10.1002/mbo3.1043 Dafei Chai 1 , Gang Wang 1 , Lin Fang 1 , Huizhong Li 1 , Shanshan Liu 1 , Haiying Zhu 1 , Junnian Zheng 1, 2
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An efficient electrotransformation system that includes electrocompetent cells is a critical component for the success of large‐scale gene transduction and replication. The conditions of TG1 competent cell preparation and optimal electrotransformation were evaluated by investigating different parameters. Certain parameters for preparation of TG1 competent cells (≥8 × 1010 colony forming units (cfu)/μg DNA) include optimum culture time of monoclonal bacteria (8–10 hr), amplification growth concentration (approximately OD600 = 0.45), and culture volume (400 ml in 2 L conical flask). With increased storage of competent cells at −80°C, electrotransformation efficiency gradually decreased, but it remains greater than ≥ 1010 cfu/μg DNA 3 months later. Moreover, the recovery time of electrotransformation also influenced electrotransformation efficiency (1.5–2 hr for optimization). The optimized transformation efficiency of TG1 (≥8 × 1010 cfu/μg DNA) was observed under suitable electric voltage (2.5 kV), electric intensity (15 kV/cm), and electric time (3.5 ms) of electricity for plasmid transformation. Optimized DNA amount (0.01–100 ng) dissolved in water led to the high efficiency of plasmid transformation (≥8 × 1010 cfu/μg DNA), but had low efficiency when dissolved in T4 ligation buffer (≤3 × 1010 cfu/μg DNA). These results indicated that an optimized TG1 transformation system is useful for high electrotransformation efficiency under general laboratory conditions. The optimized TG1 transformation system might facilitate large‐scale gene transduction for phage display library construction.
中文翻译：
TG1感受态细胞的制备和电转化的优化系统。
包含电感受态细胞的高效电转化系统是大规模基因转导和复制成功的关键组成部分。TG1感受态细胞制备和最佳电转化的条件通过研究不同的参数进行了评估。制备TG1感受态细胞的某些参数（≥8×10 10个菌落形成单位（cfu）/μgDNA）包括单克隆细菌的最佳培养时间（8-10小时），扩增生长浓度（OD 600约为 0.45）和培养体积（2 L锥形瓶中400 ml）。随着感受态细胞在-80°C下的存储量增加，电转化效率逐渐降低，但仍大于或等于10 10 3个月后cfu /μgDNA。此外，电转化的恢复时间也影响电转化效率（优化需要1.5到2个小时）。 在合适的电压（2.5 kV），电强度（15 kV / cm）和电时间（3.5 ms）进行质粒转化的条件下，观察到TG1的最佳转化效率（≥8×10 10 cfu /μgDNA）。溶解在水中的最佳DNA量（0.01–100 ng）导致质粒转化效率高（≥8×10 10 cfu /μgDNA），但是当溶解于T4连接缓冲液中时（≤3×10 10）效率低。 cfu /μgDNA）。这些结果表明，在常规实验室条件下，优化的TG1转化系统可用于提高电转化效率。优化的TG1转化系统可能有助于大规模基因转导，以构建噬菌体展示文库。
更新日期：2020-05-11
中文翻译：
TG1感受态细胞的制备和电转化的优化系统。
包含电感受态细胞的高效电转化系统是大规模基因转导和复制成功的关键组成部分。TG1感受态细胞制备和最佳电转化的条件通过研究不同的参数进行了评估。制备TG1感受态细胞的某些参数（≥8×10 10个菌落形成单位（cfu）/μgDNA）包括单克隆细菌的最佳培养时间（8-10小时），扩增生长浓度（OD 600约为 0.45）和培养体积（2 L锥形瓶中400 ml）。随着感受态细胞在-80°C下的存储量增加，电转化效率逐渐降低，但仍大于或等于10 10 3个月后cfu /μgDNA。此外，电转化的恢复时间也影响电转化效率（优化需要1.5到2个小时）。 在合适的电压（2.5 kV），电强度（15 kV / cm）和电时间（3.5 ms）进行质粒转化的条件下，观察到TG1的最佳转化效率（≥8×10 10 cfu /μgDNA）。溶解在水中的最佳DNA量（0.01–100 ng）导致质粒转化效率高（≥8×10 10 cfu /μgDNA），但是当溶解于T4连接缓冲液中时（≤3×10 10）效率低。 cfu /μgDNA）。这些结果表明，在常规实验室条件下，优化的TG1转化系统可用于提高电转化效率。优化的TG1转化系统可能有助于大规模基因转导，以构建噬菌体展示文库。
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