Despite advances in medical care, cancer remains a major threat to human health. Antibody-drug conjugates (ADCs) are a promising targeted therapy to overcome adverse side effects to normal tissues. In this field, the current challenge is obtaining homogeneous preparations of conjugates, where a defined number of drugs are conjugated to specific antibody sites. Site-directed cysteine-based conjugation is commonly used to obtain homogeneous ADC, but it is a time-consuming and expensive approach due to the need for extensive antibody engineering to identify the optimal conjugation sites and reduction - oxidation protocols are specific for each antibody. There is thus a need for ADC platforms that offer homogeneity and direct applicability to the already approved antibody therapeutics. Here we describe a novel approach to derive homogeneous ADCs with drug-to-antibody ratio of 2 from any human immunoglobulin 1 (IgG1), using trastuzumab as a model. The method is based on the production of heavy chains (HC) and light chains (LC) in two recombinant HEK293 independent cultures, so the original amino acid sequence is not altered. Isolated LC was effectively conjugated to a single drug-linker (vcMMAE) construct and mixed to isolated HC dimers, in order to obtain a correctly folded ADC. The relevance of the work was validated in terms of ADC homogeneity (HIC-HPLC, MS), purity (SEC-HPLC), isolated antigen recognition (ELISA) and biological activity (HER2-positive breast cancer cells cytotoxicity assays).

中文翻译：

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均质抗体-药物偶联物：通过在分离的轻链上偶联，然后进行mAb组装而获得的DAR 2抗HER2。

尽管医疗保健方面取得了进步，但是癌症仍然是对人类健康的主要威胁。抗体-药物偶联物（ADC）是一种有希望的靶向疗法，可以克服对正常组织的不良副作用。在该领域，当前的挑战是获得缀合物的均质制剂，其中将确定数量的药物缀合至特定抗体位点。基于定点半胱氨酸的缀合通常用于获得均质ADC，但由于需要大量抗体工程来鉴定最佳缀合位点和还原反应，因此这是一种耗时且昂贵的方法-氧化方案对每种抗体都是特异的。因此，需要提供均质性和直接适用于已经批准的抗体治疗剂的ADC平台。在这里，我们描述了一种新方法，使用曲妥珠单抗作为模型，可以从任何人免疫球蛋白1（IgG1）中获得药物与抗体之比为2的同质ADC。该方法基于两种独立于HEK293的重组培养物中重链（HC）和轻链（LC）的产生，因此原始氨基酸序列没有改变。将分离的LC有效偶联至单个药物接头（vcMMAE）构建体，并与分离的HC二聚体混合，以获得正确折叠的ADC。这项工作的相关性已通过ADC均一性（HIC-HPLC，MS），纯度（SEC-HPLC），分离的抗原识别（ELISA）和生物学活性（HER2阳性乳腺癌细胞细胞毒性测定）进行了验证。该方法基于两种独立于HEK293的重组培养物中重链（HC）和轻链（LC）的产生，因此原始氨基酸序列没有改变。将分离的LC有效偶联至单个药物接头（vcMMAE）构建体，并与分离的HC二聚体混合，以获得正确折叠的ADC。这项工作的相关性已通过ADC均一性（HIC-HPLC，MS），纯度（SEC-HPLC），分离的抗原识别（ELISA）和生物学活性（HER2阳性乳腺癌细胞细胞毒性测定）进行了验证。该方法基于两种独立于HEK293的重组培养物中重链（HC）和轻链（LC）的产生，因此原始氨基酸序列没有改变。将分离的LC有效偶联至单个药物接头（vcMMAE）构建体，并与分离的HC二聚体混合，以获得正确折叠的ADC。这项工作的相关性已通过ADC均一性（HIC-HPLC，MS），纯度（SEC-HPLC），分离的抗原识别（ELISA）和生物学活性（HER2阳性乳腺癌细胞细胞毒性测定）进行了验证。