Ultrastructural analysis of healthy, diseased, or experimental tissues is essential in diagnostic and investigative pathology. Evaluation of large tissue areas with suborganelle resolution is challenging because biological structures ranging from several millimeters to nanometers in size need to be identified and imaged while maintaining context over multiple scales. Imaging with field emission scanning electron microscopes (FE-SEMs) is uniquely suited for this task. We describe an efficient workflow for the preparation and unobstructed multiscale imaging of tissue sections with backscattered electron scanning electron microscopy (BSE-SEM) for applications in ultrastructural pathology. We demonstrate that a diverse range of tissues, processed by conventional electron microscopy protocols and avoiding the use of mordanting agents, can be imaged on standard glass slides over multiple scales, from the histological to the ultrastructural level, without any visual obstructions. Our workflow takes advantage of the very large scan fields possible with modern FE-SEMs that allow for the acquisition of wide-field overview images which can be explored at the ultrastructural level by digitally zooming into the images. Examples from applications in pulmonary research and neuropathology demonstrate the versatility and efficiency of this method. This BSE-SEM-based multiscale imaging procedure promises to substantially simplify and accelerate ultrastructural tissue analysis in pathology.

中文翻译：

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通过反向散射电子扫描显微镜对组织切片进行无阻碍的多尺度成像，以进行超微结构病理分析。

健康，患病或实验组织的超微结构分析对于诊断和研究病理至关重要。具有亚细胞器分辨率的大组织区域的评估是具有挑战性的，因为需要识别和成像大小从几毫米到纳米的生物结构，同时保持多种规模的环境。使用场发射扫描电子显微镜（FE-SEM）进行成像非常适合此任务。我们描述了一种有效的工作流程，用于组织切片的制备和无障碍多尺度成像，并具有超散射病理学应用中的反向散射电子扫描电子显微镜（BSE-SEM）。我们证明了通过常规电子显微镜协议处理的各种组织，避免了使用媒染剂，可以在从组织学到超微结构水平的多个尺度的标准载玻片上成像，而没有任何视觉障碍。我们的工作流程利用了现代FE-SEM可能具有的超大扫描场，从而可以获取宽视场概览图像，可通过对图像进行数字缩放来在超结构级别上进行探索。肺部研究和神经病理学中的应用实例证明了该方法的多功能性和有效性。这种基于BSE-SEM的多尺度成像程序有望大大简化并加速病理学中的超微结构组织分析。我们的工作流程利用了现代FE-SEM可能产生的非常大的扫描场，从而可以获取宽视场概览图像，可通过对图像进行数字缩放来在超结构水平上进行探索。肺部研究和神经病理学中的应用实例证明了该方法的多功能性和有效性。这种基于BSE-SEM的多尺度成像程序有望大大简化并加速病理学中的超微结构组织分析。我们的工作流程利用了现代FE-SEM可能产生的非常大的扫描场，从而可以获取宽视场概览图像，可通过对图像进行数字缩放来在超结构水平上进行探索。肺部研究和神经病理学中的应用实例证明了该方法的多功能性和有效性。这种基于BSE-SEM的多尺度成像程序有望大大简化并加速病理学中的超微结构组织分析。