Listeria monocytogenes is an important foodborne pathogen, causative agent of listeriosis. The epidemiology and persistence of this bacterium in meat processing plants may be related to its serotype, so it is of utmost importance to carry out a correct differentiation of L. monocytogenes serotypes. The objective of this study was to develop a unique quadruplex real-time quantitative PCR (qPCR) method able to differentiate the four most predominant and worrying L. monocytogenes serotypes (1/2a, 1/2b, 1/2c and 4b) in isolates from meat processing plants and ready-to-eat (RTE) dry-cured meat products. The design of specific primers and probes was based on the lmo0737, lmo0308, ORFC (locus genomically equivalent to gltA-gltB) and ORF2110 genes. A qPCR based on a fragment of the 16S rRNA gene was used to ensure the amplification of Listeria spp. genomic DNA. The standard curves showed efficiency values ranging between 92.3% and 105.8% and, R2 values > 0.98. The specificity of the method was also confirmed by the comparison of the results with those obtained by a previously reported conventional multiplex PCR. In addition, none of the strains which were not ascribed to L. monocytogenes amplified any of the target genes related to the four major serotypes of this pathogenic species. The qPCR, therefore, provides a sensitive, specific and rapid tool for identifying the L. monocytogenes serotypes 1/2a, 1/2b, 1/2c and 4b. This method could be very useful for identifying sources of L. monocytogenes contamination in the meat industry or for epidemiological monitoring of persistent strains throughout the processing of RTE meat products.

中文翻译：

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多重实时PCR的发展，以区分肉类加工厂分离物中的四种主要的单核细胞增生李斯特菌血清型。

单核细胞增生李斯特菌是一种重要的食源性病原体，是李斯特菌病的致病因子。这种细菌在肉类加工厂中的流行病学和持久性可能与其血清型有关，因此正确区分单核细胞增生李斯特菌血清型至关重要。这项研究的目的是开发一种独特的四重实时定量PCR（qPCR）方法，该方法能够区分分离物中的四种最主要和令人担忧的单核细胞增生李斯特菌血清型（1 / 2a，1 / 2b，1 / 2c和4b）来自肉类加工厂和即食（RTE）干腌肉制品。特定引物和探针的设计基于lmo0737，lmo0308，ORFC（基因组在基因上等同于gltA-gltB的基因座）和ORF2110基因。基于16S rRNA基因片段的qPCR用于确保李斯特菌属spp的扩增。基因组DNA。标准曲线显示效率值介于92.3％和105.8％之间，R2值> 0.98。通过将结果与先前报道的常规多重PCR所得结果进行比较，也证实了该方法的特异性。另外，没有归因于单核细胞增生李斯特氏菌的菌株均未扩增与该病原体的四种主要血清型有关的任何靶基因。因此，qPCR为鉴定单核细胞增生李斯特菌血清型1 / 2a，1 / 2b，1 / 2c和4b提供了灵敏，特异性和快速的工具。该方法对于识别肉类工业中单核细胞增生李斯特氏菌污染的来源或在整个RTE肉制品加工过程中对持久性菌株的流行病学监测非常有用。标准曲线显示效率值介于92.3％和105.8％之间，R2值> 0.98。通过将结果与先前报道的常规多重PCR所得结果进行比较，也证实了该方法的特异性。另外，没有归因于单核细胞增生李斯特氏菌的菌株均未扩增与该病原体的四种主要血清型有关的任何靶基因。因此，qPCR为鉴定单核细胞增生李斯特菌血清型1 / 2a，1 / 2b，1 / 2c和4b提供了灵敏，特异性和快速的工具。该方法对于识别肉类工业中单核细胞增生李斯特氏菌污染的来源或在整个RTE肉制品加工过程中对持久性菌株的流行病学监测非常有用。标准曲线显示效率值介于92.3％和105.8％之间，R2值> 0.98。通过将结果与先前报道的常规多重PCR所得结果进行比较，也证实了该方法的特异性。另外，没有归因于单核细胞增生李斯特氏菌的菌株均未扩增与该病原体的四种主要血清型有关的任何靶基因。因此，qPCR为鉴定单核细胞增生李斯特菌血清型1 / 2a，1 / 2b，1 / 2c和4b提供了灵敏，特异性和快速的工具。该方法对于识别肉类工业中单核细胞增生李斯特氏菌污染的来源或在整个RTE肉制品加工过程中对持久性菌株的流行病学监测非常有用。通过将结果与先前报道的常规多重PCR所得结果进行比较，也证实了该方法的特异性。另外，没有归因于单核细胞增生李斯特氏菌的菌株均未扩增与该病原体的四种主要血清型有关的任何靶基因。因此，qPCR为鉴定单核细胞增生李斯特菌血清型1 / 2a，1 / 2b，1 / 2c和4b提供了灵敏，特异性和快速的工具。该方法对于识别肉类工业中单核细胞增生李斯特氏菌污染的来源或在整个RTE肉制品加工过程中对持久性菌株的流行病学监测非常有用。通过将结果与先前报道的常规多重PCR所得结果进行比较，也证实了该方法的特异性。另外，没有归因于单核细胞增生李斯特氏菌的菌株均未扩增与该病原体的四种主要血清型有关的任何靶基因。因此，qPCR为鉴定单核细胞增生李斯特菌血清型1 / 2a，1 / 2b，1 / 2c和4b提供了灵敏，特异性和快速的工具。该方法对于识别肉类工业中单核细胞增生李斯特氏菌污染的来源或在整个RTE肉制品加工过程中对持久性菌株的流行病学监测非常有用。没有归因于单核细胞增生李斯特氏菌的菌株中没有一个扩增与该病原体的四种主要血清型有关的靶基因。因此，qPCR为鉴定单核细胞增生李斯特菌血清型1 / 2a，1 / 2b，1 / 2c和4b提供了灵敏，特异性和快速的工具。该方法对于识别肉类工业中单核细胞增生李斯特氏菌污染的来源或在整个RTE肉制品加工过程中对持久性菌株的流行病学监测非常有用。未归因于单核细胞增生李斯特氏菌的菌株均未扩增与该病原体的四种主要血清型有关的任何靶基因。因此，qPCR为鉴定单核细胞增生李斯特菌血清型1 / 2a，1 / 2b，1 / 2c和4b提供了灵敏，特异性和快速的工具。该方法对于识别肉类工业中单核细胞增生李斯特氏菌污染的来源或在整个RTE肉制品加工过程中对持久性菌株的流行病学监测非常有用。