Marek's disease (MD) is one of the most devastating diseases of poultry. It's caused by the highly infectious alphaherpesvirus MD virus serotype 1 (MDV-1). In this study, a rapid and easy-to-use assay based on recombinase polymerase amplification (RPA) was developed for MDV detection. Primer-probe sets targeting the highly conserved region of Meq gene were designed and applied to the RPA assay. The assay was carried out on a real-time thermostatic fluorescence detector at 39 °C for 20 min. As revealed by the results, no cross-reactions were found with the Newcastle disease virus (NDV), chicken infectious anemia virus (CAV), infectious bursal disease virus (IBDV), avian infectious bronchitis virus (IBV), infectious laryngotracheitis virus (ILTV), avain influenza virus (AIV), avian leucosis virus (ALV), avian reovirus (ARV), Marek's disease virus serotype 2 (MDV-2) and turkey herpes virus (HVT), indicating appropriate specificity of the assay. Plasmid DNA standards were used to determine the sensitivity of the assay and the detection limit was 102copies/μL. To further evaluate the clinical performance, 94 clinical samples were subjected to the RPA assay and 28 samples were tested MDV positive, suggesting that the real-time RPA assay was sufficient enough for clinical sample detection. Thus, a highly specific and sensitive real-time RPA assay was established and validated as a candidate for MDV diagnosis. Additionally, the portability of real-time RPA assay makes it suitable to be potentially applied in clinical diagnosis in the field, especially in resource-limited settings.

中文翻译：

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快速灵敏的实时重组酶聚合酶扩增，可检测马立克氏病病毒。

马立克氏病（MD）是最致命的家禽疾病之一。它是由高度感染性的α疱疹病毒MD血清型1（MDV-1）引起的。在这项研究中，开发了一种基于重组酶聚合酶扩增（RPA）的快速且易于使用的测定方法，用于MDV检测。设计了针对Meq基因高度保守区域的引物探针集，并将其应用于RPA分析。在实时恒温荧光检测器上于39°C进行20分钟分析。结果表明，未发现与新城疫病毒（NDV），鸡传染性贫血病毒（CAV），传染性法氏囊病病毒（IBDV），禽传染性支气管炎病毒（IBV），传染性喉气管炎病毒（ILTV）有交叉反应），无用型流感病毒（AIV），禽白血病病毒（ALV），禽呼肠孤病毒（ARV），Marek' 氏病病毒血清型2（MDV-2）和火鸡疱疹病毒（HVT），表明该测定法具有适当的特异性。质粒DNA标准液用于测定测定的灵敏度，检出限为102拷贝/μL。为了进一步评估临床表现，对94个临床样品进行了RPA测定，并对28个样品的MDV阳性进行了测试，这表明实时RPA测定足以用于临床样品检测。因此，建立了高度特异性和灵敏的实时RPA测定法，并将其验证为MDV诊断的候选者。此外，实时RPA分析的便携性使其适合潜在地应用于该领域的临床诊断，尤其是在资源有限的环境中。表明该测定法具有适当的特异性。质粒DNA标准液用于测定测定的灵敏度，检出限为102拷贝/μL。为了进一步评估临床表现，对94个临床样品进行了RPA测定，并对28个样品的MDV阳性进行了测试，这表明实时RPA测定足以用于临床样品检测。因此，建立了高度特异性和灵敏的实时RPA测定法，并将其验证为MDV诊断的候选者。此外，实时RPA分析的便携性使其适合潜在地应用于该领域的临床诊断，尤其是在资源有限的环境中。表明该测定法具有适当的特异性。质粒DNA标准液用于测定测定的灵敏度，检出限为102拷贝/μL。为了进一步评估临床表现，对94个临床样品进行了RPA分析，并对28个样品的MDV阳性进行了测试，这表明实时RPA分析足以用于临床样品检测。因此，建立了高度特异性和灵敏的实时RPA测定法，并将其验证为MDV诊断的候选者。此外，实时RPA分析的便携性使其适合潜在地应用于该领域的临床诊断，尤其是在资源有限的环境中。对94个临床样品进行了RPA分析，并对28个样品的MDV阳性进行了测试，这表明实时RPA分析足以用于临床样品检测。因此，建立了高度特异性和灵敏的实时RPA测定法，并将其验证为MDV诊断的候选者。此外，实时RPA分析的便携性使其适合潜在地应用于该领域的临床诊断，尤其是在资源有限的环境中。对94个临床样品进行了RPA分析，并对28个样品的MDV阳性进行了测试，这表明实时RPA分析足以用于临床样品检测。因此，建立了高度特异性和灵敏的实时RPA测定法，并将其验证为MDV诊断的候选者。此外，实时RPA分析的便携性使其适合潜在地应用于该领域的临床诊断，尤其是在资源有限的环境中。