BACKGROUND MDR transporters are important biomarkers of drug resistance in cancer and in autoimmune conditions. We determined the MDR1, MRP1 and BCRP activity in CD3+ lymphocytes using a flow cytometry based method from 120 healthy volunteers in order to describe normal reference values of the activity of these transporters. The effects of gender and age were also determined. METHODS The Solvo MDQ Kit™ was used for measurements. In this assay, fluorescent reporter substrates (Calcein-AM for MDR1 and MRP1 and mitoxantrone for BCRP, respectively) are trapped in the cytoplasm and pumped out by MDR proteins depending on the presence or absence of specific inhibitors (verapamil for MDR1 and MRP1, indomethacin for MRP1 and KO134 for BCRP, respectively), allowing for quantitative, standardized assessment. Cell surface staining was applied to select CD3+ cells. RESULTS MAF values of MRP1 and BCRP are independent from age. MAFC and MAF of MDR1 show negative correlation with the age of the studied subjects (P = 0.003, r = -0.27 and P = 0.0001, r = -0.34, respectively). No difference was detected in any of the four MAF values between men and women. Gender does not affect the presence or lack of correlation between MAF values and age. CONCLUSIONS The determination of the functional activity of MDR-ABC transporters is achievable using a flow cytometry based standardized method. Having established the normal range of MAF values on CD3+ lymphocytes of a healthy population, our results allow for the development of novel flow cytometry based diagnostic tools. © 2018 International Clinical Cytometry Society.

中文翻译：

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使用基于流式细胞术的方法确定健康志愿者CD3 +淋巴细胞中MDR-ABC转运蛋白活性的参考值。

背景技术MDR转运蛋白是癌症和自身免疫性疾病中耐药性的重要生物标志物。为了描述这些转运蛋白活性的正常参考值，我们使用了基于流式细胞仪的方法，从120名健康志愿者中确定了CD3 +淋巴细胞中的MDR1，MRP1和BCRP活性。还确定了性别和年龄的影响。方法使用Solvo MDQ Kit™进行测量。在该测定中，荧光报告物底物（分别针对MDR1和MRP1的钙蛋白-AM和针对BCRP的米托蒽醌）被捕获在细胞质中，并根据是否存在特定抑制剂（对于MDR1和MRP1为维拉帕米，消炎痛为吲哚美辛）被MDR蛋白泵出分别适用于MRP1和KO134（适用于BCRP）），以便进行定量，标准化的评估。应用细胞表面染色以选择CD3 +细胞。结果MRP1和BCRP的MAF值与年龄无关。MDR1的MAFC和MAF与研究对象的年龄呈负相关（分别为P = 0.003，r = -0.27和P = 0.0001，r = -0.34）。男女在四个MAF值中均未发现差异。性别不会影响MAF值与年龄之间是否存在相关性。结论使用基于流式细胞仪的标准化方法可以确定MDR-ABC转运蛋白的功能活性。在健康人群的CD3 +淋巴细胞上建立了MAF值的正常范围后，我们的结果允许开发基于新型流式细胞仪的诊断工具。©2018国际临床细胞计量学会。结果MRP1和BCRP的MAF值与年龄无关。MDR1的MAFC和MAF与研究对象的年龄呈负相关（分别为P = 0.003，r = -0.27和P = 0.0001，r = -0.34）。男女在四个MAF值中均未发现差异。性别不会影响MAF值与年龄之间是否存在相关性。结论使用基于流式细胞仪的标准化方法可以确定MDR-ABC转运蛋白的功能活性。在健康人群的CD3 +淋巴细胞上建立了MAF值的正常范围后，我们的结果允许开发基于新型流式细胞仪的诊断工具。©2018国际临床细胞计量学会。结果MRP1和BCRP的MAF值与年龄无关。MDR1的MAFC和MAF与研究对象的年龄呈负相关（分别为P = 0.003，r = -0.27和P = 0.0001，r = -0.34）。男性和女性的四个MAF值均未发现差异。性别不会影响MAF值与年龄之间是否存在相关性。结论使用基于流式细胞仪的标准化方法可以确定MDR-ABC转运蛋白的功能活性。在健康人群的CD3 +淋巴细胞上建立了MAF值的正常范围后，我们的结果允许开发基于新型流式细胞仪的诊断工具。©2018国际临床细胞计量学会。MDR1的MAFC和MAF与研究对象的年龄呈负相关（分别为P = 0.003，r = -0.27和P = 0.0001，r = -0.34）。男女在四个MAF值中均未发现差异。性别不会影响MAF值与年龄之间是否存在相关性。结论使用基于流式细胞仪的标准化方法可以确定MDR-ABC转运蛋白的功能活性。在健康人群的CD3 +淋巴细胞上建立了MAF值的正常范围后，我们的结果允许开发基于新型流式细胞仪的诊断工具。©2018国际临床细胞计量学会。MDR1的MAFC和MAF与研究对象的年龄呈负相关（分别为P = 0.003，r = -0.27和P = 0.0001，r = -0.34）。男女在四个MAF值中均未发现差异。性别不会影响MAF值与年龄之间是否存在相关性。结论使用基于流式细胞仪的标准化方法可以确定MDR-ABC转运蛋白的功能活性。在健康人群的CD3 +淋巴细胞上建立了MAF值的正常范围后，我们的结果允许开发基于新型流式细胞仪的诊断工具。©2018国际临床细胞计量学会。性别不会影响MAF值与年龄之间是否存在相关性。结论使用基于流式细胞仪的标准化方法可以确定MDR-ABC转运蛋白的功能活性。在健康人群的CD3 +淋巴细胞上建立了MAF值的正常范围后，我们的结果允许开发基于新型流式细胞仪的诊断工具。©2018国际临床细胞计量学会。性别不会影响MAF值与年龄之间是否存在相关性。结论使用基于流式细胞仪的标准化方法可以确定MDR-ABC转运蛋白的功能活性。在健康人群的CD3 +淋巴细胞上建立了MAF值的正常范围后，我们的结果允许开发基于新型流式细胞仪的诊断工具。©2018国际临床细胞计量学会。