Several microscopy methods have been developed to assess the morphological changes in cells in the investigations of the mode of cell death in response to a stimulus. Our recent finding on the treatment of the IC50 concentration (26.67 μg/mL) of Polyalthia longifolia leaf extract indicated the induction of apoptotic cell death via the regulation of miRNA in HeLa cells. Hence, the current study was conducted to validate the function of these downregulated microRNAs in P. longifolia-treated HeLa cells using microscopic approaches. These include scanning electron microscope (SEM), transmission electron microscope (TEM), and acridine orange/propidium iodide (AO/PI)-based fluorescent microscopy techniques by observing the morphological alterations to cells after transfection with mimic miRNA. Interestingly, the morphological changes observed in this study demonstrated the apoptotic hallmarks, for instance, cell blebbing, cell shrinkage, cytoplasmic and nuclear condensation, vacuolization, cytoplasmic extrusion, and the formation of apoptotic bodies, which proved the role of dysregulated miRNAs in apoptotic HeLa cell death after treatment with the P. longifolia leaf extract. Conclusively, the current study proved the crucial role of downregulated miR-484 and miR-221-5p in the induction of apoptotic cell death in P. longifolia-treated HeLa cells using three approaches-SEM, TEM, and AO/PI-based fluorescent microscope.

中文翻译：

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使用不同的显微方法对用长叶草提取物处理的 HeLa 细胞中下调的 MicroRNA 进行功能验证：基于形态学改变的验证

已经开发了几种显微镜方法来评估细胞在响应刺激的细胞死亡模式的研究中的形态变化。我们最近对长叶草提取物 IC50 浓度 (26.67 μg/mL) 的处理发现表明，通过调节 HeLa 细胞中的 miRNA，可以诱导细胞凋亡。因此，目前的研究旨在使用显微方法验证这些下调的 microRNA 在 P. longifolia 处理的 HeLa 细胞中的功能。这些包括扫描电子显微镜 (SEM)、透射电子显微镜 (TEM) 和基于吖啶橙/碘化丙啶 (AO/PI) 的荧光显微镜技术，通过观察模拟 miRNA 转染后细胞的形态变化。有趣的是，本研究中观察到的形态学变化证明了细胞起泡、细胞收缩、细胞质和核浓缩、空泡化、细胞质挤出和凋亡小体形成等凋亡特征，这证明了失调的 miRNA 在凋亡 HeLa 细胞死亡中的作用用 P. longifolia 叶提取物处理后。总之，目前的研究证明了下调的 miR-484 和 miR-221-5p 在诱导长叶假单胞菌处理的 HeLa 细胞凋亡细胞死亡中的关键作用，使用三种方法 - SEM、TEM 和基于 AO/PI 的荧光显微镜。这证明了用 P. longifolia 叶提取物处理后失调的 miRNA 在凋亡 HeLa 细胞死亡中的作用。总之，目前的研究证明了下调的 miR-484 和 miR-221-5p 在诱导长叶假单胞菌处理的 HeLa 细胞凋亡细胞死亡中的关键作用，使用三种方法 - SEM、TEM 和基于 AO/PI 的荧光显微镜。这证明了用 P. longifolia 叶提取物处理后失调的 miRNA 在凋亡 HeLa 细胞死亡中的作用。总之，目前的研究证明了下调的 miR-484 和 miR-221-5p 在诱导长叶假单胞菌处理的 HeLa 细胞凋亡细胞死亡中的关键作用，使用三种方法 - SEM、TEM 和基于 AO/PI 的荧光显微镜。