We previously found that (pro)renin receptor ((P)RR) augments Wnt3 protein without affecting Wnt3 gene transcription in colorectal cancer (CRC) cells, thus contributes to CRC initiation. The present study aims to investigate whether (P)RR further promotes CRC progression following oncogenesis and the related mechanisms. Notably, we deeply elaborate how (P)RR affects Wnt3 protein level and the key enzyme that mediates this process. Immunohistochemistry, western blotting and immunofluorescence were performed to detect protein expression status. A kind of gastrointestinal epithelium-specific ATP6AP2 ((P)RR encoding gene) knock-in mice were generated using Crispr/Cas9 system. We found that increased (P)RR expression in primary CRC lesions is positively associated with higher Wnt3 protein level and disease progression. Progressive CRC presents less colocalization of Wnt3 and an E3 ubiquitin ligase NEDD4L in primary lesions than non-progressive CRC. In colon cancer cells, (P)RR dramatically inhibits the NEDD4L-mediated Wnt3 protein ubiquitination. ATP6AP2 knock-in mice show more diminished Wnt3-NEDD4L colocalization in their gut epithelium in comparison to wildtype mice. They also have abnormal gut bacterial flora distribution. Especially, Lachnospiraceae_NK4A136 and Bacteroides genus, which are generally protective against CRC, are suppressed in guts of ATP6AP2 knock-in mice. Collectively, (P)RR promotes CRC progression through inhibiting the NEDD4L-mediated Wnt3 ubiquitination and modulating gut microbiota.

中文翻译：

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（Pro）肾素受体通过抑制 NEDD4L 介导的 Wnt3 泛素化和调节肠道微生物群促进结直肠癌进展

我们之前发现肾素原受体 ((P)RR) 在不影响结直肠癌 (CRC) 细胞中的 Wnt3 基因转录的情况下增强 Wnt3 蛋白，从而有助于 CRC 的启动。本研究旨在探讨 (P)RR 是否进一步促进肿瘤发生后的 CRC 进展及其相关机制。值得注意的是，我们深入阐述了 (P)RR 如何影响 Wnt3 蛋白水平以及介导该过程的关键酶。进行免疫组织化学、蛋白质印迹和免疫荧光以检测蛋白质表达状态。利用 Crispr/Cas9 系统构建了一种胃肠上皮特异性 ATP6AP2（(P)RR 编码基因）敲入小鼠。我们发现原发性 CRC 病变中增加的 (P)RR 表达与较高的 Wnt3 蛋白水平和疾病进展呈正相关。与非进行性 CRC 相比，进行性 CRC 在原发性病变中表现出较少的 Wnt3 和 E3 泛素连接酶 NEDD4L 共定位。在结肠癌细胞中，(P)RR 显着抑制 NEDD4L 介导的 Wnt3 蛋白泛素化。与野生型小鼠相比，ATP6AP2 敲入小鼠在其肠道上皮细胞中显示出更多减少的 Wnt3-NEDD4L 共定位。它们还具有异常的肠道菌群分布。特别是，通常对 CRC 具有保护作用的 Lachnospiraceae_NK4A136 和拟杆菌属在 ATP6AP2 敲入小鼠的肠道中受到抑制。总的来说，(P)RR 通过抑制 NEDD4L 介导的 Wnt3 泛素化和调节肠道微生物群来促进 CRC 进展。(P)RR 显着抑制 NEDD4L 介导的 Wnt3 蛋白泛素化。与野生型小鼠相比，ATP6AP2 敲入小鼠在其肠道上皮细胞中显示出更多减少的 Wnt3-NEDD4L 共定位。它们还具有异常的肠道菌群分布。特别是，通常对 CRC 具有保护作用的 Lachnospiraceae_NK4A136 和拟杆菌属在 ATP6AP2 敲入小鼠的肠道中受到抑制。总的来说，(P)RR 通过抑制 NEDD4L 介导的 Wnt3 泛素化和调节肠道微生物群来促进 CRC 进展。(P)RR 显着抑制 NEDD4L 介导的 Wnt3 蛋白泛素化。与野生型小鼠相比，ATP6AP2 敲入小鼠在其肠道上皮细胞中显示出更多减少的 Wnt3-NEDD4L 共定位。它们还具有异常的肠道菌群分布。特别是，通常对 CRC 具有保护作用的 Lachnospiraceae_NK4A136 和 Bacteroides 属在 ATP6AP2 敲入小鼠的肠道中受到抑制。总的来说，(P)RR 通过抑制 NEDD4L 介导的 Wnt3 泛素化和调节肠道微生物群来促进 CRC 进展。通常对 CRC 具有保护作用的蛋白质在 ATP6AP2 敲入小鼠的肠道中受到抑制。总的来说，(P)RR 通过抑制 NEDD4L 介导的 Wnt3 泛素化和调节肠道微生物群来促进 CRC 进展。通常对 CRC 具有保护作用的蛋白质在 ATP6AP2 敲入小鼠的肠道中受到抑制。总的来说，(P)RR 通过抑制 NEDD4L 介导的 Wnt3 泛素化和调节肠道微生物群来促进 CRC 进展。