During the production of cell and gene therapy products, residual host cell DNA (HCD) could cause safety risks of the biological products, and the longer the residual HCD fragment, the greater the risk to the human body. For this reason, it was necessary to develop an effective method for the size distribution analysis of residual HCD fragments with high accuracy and sensitivity. In this study, capillary gel electrophoresis with laser-induced fluorescence detector (CGE-LIF) was used to analyze the size distribution of residual HCD fragments in lentivirus products. The results confirmed that lentiviral RNA genome could interfere with the size distribution analysis of residual HCD fragments. By optimizing the amount of RNase I and digestion time in sample pretreatment process, the interfere of RNA genome could be avoided. The specificity, precision, accuracy, linear range, the detection of limit (LOD), and the quantification of limit (LOQ) of CGE-LIF method were also validated. The results showed that the CGE-LIF method had a good performance both in terms of specificity and reproducibility. The intra- and inter-day relative standard deviations of migration time and corrected peak area were all less than 1% and 2%, respectively. The 200 bp DNA marker had a good linearity between 50 and 1000 pg/ml. The LOD and LOQ of 200 bp DNA marker were 2.59 and 8.64 pg/ml, respectively. In addition, this method was successfully used to analyze the size distribution analysis of residual HCD fragments in lentivirus products with different production processes.

中文翻译：

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通过 CGE-LIF 分析慢病毒中残留宿主细胞 DNA 片段的大小分布

在细胞和基因治疗产品的生产过程中，残留的宿主细胞DNA（HCD）会造成生物制品的安全风险，残留的HCD片段越长，对人体的风险越大。为此，有必要开发一种高精度、高灵敏度的残留HCD碎片尺寸分布分析的有效方法。在这项研究中，毛细管凝胶电泳与激光诱导荧光检测器 (CGE-LIF) 用于分析慢病毒产品中残留 HCD 片段的大小分布。结果证实慢病毒RNA基因组可以干扰残留HCD片段的大小分布分析。通过优化样本预处理过程中RNase I的用量和消化时间，可以避免RNA基因组的干扰。特异性、精确性、还对 CGE-LIF 方法的准确度、线性范围、检测限 (LOD) 和定量限 (LOQ) 进行了验证。结果表明，CGE-LIF方法在特异性和重现性方面均具有良好的性能。迁移时间和校正峰面积的日内和日间相对标准偏差分别小于 1% 和 2%。200 bp DNA 标记在 50 和 1000 pg/ml 之间具有良好的线性。200 bp DNA 标记的 LOD 和 LOQ 分别为 2.59 和 8.64 pg/ml。此外，该方法还成功用于分析不同生产工艺的慢病毒产品中残留HCD片段的大小分布分析。结果表明，CGE-LIF方法在特异性和重现性方面均具有良好的性能。迁移时间和校正峰面积的日内和日间相对标准偏差分别小于 1% 和 2%。200 bp DNA 标记在 50 和 1000 pg/ml 之间具有良好的线性。200 bp DNA 标记的 LOD 和 LOQ 分别为 2.59 和 8.64 pg/ml。此外，该方法还成功用于分析不同生产工艺的慢病毒产品中残留HCD片段的大小分布分析。结果表明，CGE-LIF方法在特异性和重现性方面均具有良好的性能。迁移时间和校正峰面积的日内和日间相对标准偏差分别小于 1% 和 2%。200 bp DNA 标记在 50 和 1000 pg/ml 之间具有良好的线性。200 bp DNA 标记的 LOD 和 LOQ 分别为 2.59 和 8.64 pg/ml。此外，该方法还成功用于分析不同生产工艺的慢病毒产品中残留HCD片段的大小分布分析。200 bp DNA 标记在 50 和 1000 pg/ml 之间具有良好的线性。200 bp DNA 标记的 LOD 和 LOQ 分别为 2.59 和 8.64 pg/ml。此外，该方法还成功用于分析不同生产工艺的慢病毒产品中残留HCD片段的大小分布分析。200 bp DNA 标记在 50 和 1000 pg/ml 之间具有良好的线性。200 bp DNA 标记的 LOD 和 LOQ 分别为 2.59 和 8.64 pg/ml。此外，该方法还成功用于分析不同生产工艺的慢病毒产品中残留HCD片段的大小分布分析。