Bacillus thuringiensis (Bt) Berliner is an omnipresent soil bacterium used as world’s leading biopesticide to combat agriculturally important insect pests. This study was aimed at protein and gene profiling of an indigenous Bt isolate RM11, which was toxic to the larvae of diamondback moth, Plutella xylostella (L.) in laboratory bioassays. Indigenous Bt isolate RM11 was characterized along with the standard checks B. thuringiensis subsp. kurstaki (Btk) HD1 and 78/11, based on colony characters, protein profile and PCR screening. All three Bt colonies were fried egg type, white in color with flat elevation and undulated margin. PCR screening revealed the presence of cry1Ac and vip3A genes, which encode lepidopteran toxic proteins in RM11. SDS-PAGE results showed the presence of a prominent protein band of cry1Ac, vip3A with molecular weights 135 kDa, 88 kDa and other bands at 70, 50, 32 and 10 kDa. In leaf disk bioassay with spore crystal mixture, RM11 exhibited toxicity with LC50 of 4.51 µg/ml as against 0.07 µg/ml in positive standard HD1, based on mortality at 72 h after treatment. At LC50 of 4.51 µg/ml, solubilized and insolubilized protein of RM11 was found to produce 56 and 70% mortality. The present study revealed that RM11 could be a viable alternative for consideration in developing a native Bt formulation and for inclusion in the integrated management of P. xylostella with other native isolates producing different toxins. Furthermore, these findings imply that RM11 could be a source of new cry toxin, which can be confirmed through whole-genome sequencing analysis.

中文翻译：

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本土苏云金芽孢杆菌分离株 RM11 对小菜蛾、小菜蛾 (L.) 有毒的表征（鳞翅目：小菜蛾科）

苏云金芽孢杆菌 (Bt) Berliner 是一种无处不在的土壤细菌，被用作世界领先的生物农药来对抗农业上重要的害虫。本研究旨在对本地 Bt 分离物 RM11 进行蛋白质和基因分析，该分离物在实验室生物测定中对小菜蛾幼虫 Plutella xylostella (L.) 具有毒性。本土 Bt 分离株 RM11 与标准检查 B. thuringiensis subsp. 一起被表征。kurstaki (Btk) HD​​1 和 78/11，基于菌落特征、蛋白质谱和 PCR 筛选。三个 Bt 菌落均为煎蛋型，​​颜色为白色，高度平坦，边缘呈波浪状。PCR 筛选显示存在 cry1Ac 和 vip3A 基因，它们在 RM11 中编码鳞翅目有毒蛋白。SDS-PAGE结果显示存在明显的cry1Ac蛋白条带，vip3A 的分子量为 135 kDa、88 kDa 和 70、50、32 和 10 kDa 的其他条带。在使用孢子晶体混合物的叶盘生物测定中，基于处理后 72 小时的死亡率，RM11 表现出毒性，LC50 为 4.51 µg/ml，而阳性标准 HD1 为 0.07 µg/ml。在 4.51 µg/ml 的 LC50 时，发现 RM11 的溶解和不溶解蛋白质产生 56% 和 70% 的死亡率。目前的研究表明，RM11 可能是一种可行的替代方案，可用于开发天然 Bt 制剂并纳入小菜蛾与其他产生不同毒素的天然分离物的综合管理中。此外，这些发现表明 RM11 可能是新的 cry 毒素的来源，这可以通过全基因组测序分析得到证实。在使用孢子晶体混合物的叶盘生物测定中，基于处理后 72 小时的死亡率，RM11 表现出毒性，LC50 为 4.51 µg/ml，而阳性标准 HD1 为 0.07 µg/ml。在 4.51 µg/ml 的 LC50 时，发现 RM11 的溶解和不溶解蛋白质产生 56% 和 70% 的死亡率。目前的研究表明，RM11 可能是一种可行的替代方案，可用于开发天然 Bt 制剂并纳入小菜蛾与其他产生不同毒素的天然分离物的综合管理中。此外，这些发现表明 RM11 可能是新的 cry 毒素的来源，这可以通过全基因组测序分析得到证实。在使用孢子晶体混合物的叶盘生物测定中，基于处理后 72 小时的死亡率，RM11 表现出毒性，LC50 为 4.51 µg/ml，而阳性标准 HD1 为 0.07 µg/ml。在 4.51 µg/ml 的 LC50 时，发现 RM11 的溶解和不溶解蛋白质产生 56% 和 70% 的死亡率。目前的研究表明，RM11 可能是一种可行的替代方案，可用于开发天然 Bt 制剂并纳入小菜蛾与其他产生不同毒素的天然分离物的综合管理中。此外，这些发现表明 RM11 可能是新的 cry 毒素的来源，这可以通过全基因组测序分析得到证实。发现 RM11 的 51 µg/ml 溶解和不溶解蛋白质会产生 56% 和 70% 的死亡率。目前的研究表明，RM11 可能是一种可行的替代方案，可用于开发天然 Bt 制剂并纳入小菜蛾与其他产生不同毒素的天然分离物的综合管理中。此外，这些发现表明 RM11 可能是新的 cry 毒素的来源，这可以通过全基因组测序分析得到证实。发现 RM11 的 51 µg/ml 溶解和不溶解蛋白质会产生 56% 和 70% 的死亡率。目前的研究表明，RM11 可能是一种可行的替代方案，可用于开发天然 Bt 制剂并纳入小菜蛾与其他产生不同毒素的天然分离物的综合管理中。此外，这些发现表明 RM11 可能是新的 cry 毒素的来源，这可以通过全基因组测序分析得到证实。