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Characterization of a heptapeptide-modified microsphere for oriented antibody immobilization
Journal of Peptide Science ( IF 2.1 ) Pub Date : 2022-04-12 , DOI: 10.1002/psc.3411
Shu Bai 1 , Jie Zhang 1 , Liyan Zhu 1 , Xiaoxing Gong 1 , Linling Yu 1 , Yan Sun 1
Affiliation  

Oriented immobilization of antibodies is important for the effective recognition of target antigens. In this paper, a heptapeptide ligand, HWRGWVC (HC7), was modified onto non-porous monosized poly(glyceryl methacrylate) (pGMA) microspheres (named pGMA-HC7) to explore the antibody immobilization behaviors. Characterization of the microspheres by particle size analyzer, scanning electron microscopy, Fourier transform infrared spectroscopy, and reversed-phase chromatography proved the success of each fabrication step. The capacity and activity of antibody immobilization through HC7 were studied using immunoglobulin G (IgG) as a model antibody and horseradish peroxidase (HRP) as a model antigen. Additionally, IgG immobilizations on pGMA microspheres by nonspecific adsorption and covalent coupling through carbodiimide chemistry were conducted for comparison. pGMA-HC7 exhibited an IgG adsorption capacity of 3–4 mg/g in 10 min by the specific binding of HC7 without nonspecific interactions. Notably, the ligand HC7 showed a by two orders of magnitude stronger affinity for IgG than its original hexapeptide ligand HWRGWV. Moreover, the capacity and activity of the immobilized anti-HRP antibody on pGMA-HC7 were 1.6-fold and 3-fold higher than those of the covalent coupling, respectively. The results proved the superior role of HWRGWVC in the affinity binding of antibody and the potential of pGMA-HC7-25 in immunoassay and immunodiagnostic applications.

中文翻译:

用于定向抗体固定的七肽修饰微球的表征

抗体的定向固定对于有效识别靶抗原很重要。在本文中,将七肽配体 HWRGWVC (HC7) 修饰到无孔单尺寸聚甲基丙烯酸甘油酯 (pGMA) 微球(命名为 pGMA-HC7)上,以探索抗体的固定行为。通过粒度分析仪、扫描电子显微镜、傅里叶变换红外光谱和反相色谱对微球进行表征,证明了每个制造步骤的成功。使用免疫球蛋白 G (IgG) 作为模型抗体和辣根过氧化物酶 (HRP) 作为模型抗原,研究了通过 HC7 固定抗体的能力和活性。此外,通过非特异性吸附和通过碳二亚胺化学的共价偶联将 IgG 固定在 pGMA 微球上进行比较。通过 HC7 的特异性结合,pGMA-HC7 在 10 分钟内表现出 3-4 mg/g 的 IgG 吸附能力,而没有非特异性相互作用。值得注意的是,配体 HC7 对 IgG 的亲和力比其原始六肽配体 HWRGWV 高两个数量级。此外,固定化抗 HRP 抗体对 pGMA-HC7 的容量和活性分别是共价偶联的 1.6 倍和 3 倍。结果证明了HWRGWVC在抗体亲和结合中的优越作用以及pGMA-HC7-25在免疫测定和免疫诊断应用中的潜力。通过 HC7 的特异性结合,pGMA-HC7 在 10 分钟内表现出 3-4 mg/g 的 IgG 吸附能力,而没有非特异性相互作用。值得注意的是,配体 HC7 对 IgG 的亲和力比其原始六肽配体 HWRGWV 高两个数量级。此外,固定化抗 HRP 抗体对 pGMA-HC7 的容量和活性分别是共价偶联的 1.6 倍和 3 倍。结果证明了HWRGWVC在抗体亲和结合中的优越作用以及pGMA-HC7-25在免疫测定和免疫诊断应用中的潜力。通过 HC7 的特异性结合,pGMA-HC7 在 10 分钟内表现出 3-4 mg/g 的 IgG 吸附能力,而没有非特异性相互作用。值得注意的是,配体 HC7 对 IgG 的亲和力比其原始六肽配体 HWRGWV 高两个数量级。此外,固定化抗 HRP 抗体对 pGMA-HC7 的容量和活性分别是共价偶联的 1.6 倍和 3 倍。结果证明了HWRGWVC在抗体亲和结合中的优越作用以及pGMA-HC7-25在免疫测定和免疫诊断应用中的潜力。分别是共价偶联的 6 倍和 3 倍。结果证明了HWRGWVC在抗体亲和结合中的优越作用以及pGMA-HC7-25在免疫测定和免疫诊断应用中的潜力。分别是共价偶联的 6 倍和 3 倍。结果证明了HWRGWVC在抗体亲和结合中的优越作用以及pGMA-HC7-25在免疫测定和免疫诊断应用中的潜力。
更新日期:2022-04-12
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