ABSTRACT

One major problem with cacao crops is the variability of plantings obtained from seeds. This has led to considering somatic embryogenesis (SE), a means of obtaining stable clones with minimal somaclonal variation; however, achieving this has not been possible with many genotypes. In this work, we used IMC67 genotype (rootstock in the traditional grafting process) to evaluated various SE protocols; four culture media for induction and expression primary embryogenesis (PSE): induction medium (INDI), expression medium (INDIEXP), primary callus induction medium (PCG), and secondary callus growth medium (SCG), as well as two explants (petal and staminode). Different culture times for PSE (15, 25, 35, 45, 55, 65 days) and SSE (10, 20, 30, 40, 50, 70, 80 days) were evaluated in terms of callus formation, PSE, and SSE. For acclimation, seven substrates were evaluated for plantlet survival. One hundred percent callogenesis was achieved at 50 days with the staminode in INDI, and the most PSE per explant (8) in INDIexp was achieved at 45 days. Secondary somatic embryogenesis (SSE) obtained the most globular and cotyledonary embryos (30) at 30 days in callus multiplication (CM2). The embryos achieved conversion and development into plantlets in maturation medium (MM6). Embryogenic efficiency from explants was 11.7 for PSE, and 15.2 for SSE. Acclimation obtained a 42.1% survival rate in the 70% sand- 30% soil substrate. This work reports a complete regeneration protocol via somatic embryogenesis up to plantlet development in a nursey for the IMC67 rootstock genotype; contributing to standardizing a high-quality plant production system.

摘要

可可作物的一个主要问题是从种子中获得的种植的可变性。这导致考虑体细胞胚胎发生（SE），这是一种获得具有最小体细胞克隆变异的稳定克隆的方法；然而，许多基因型无法实现这一目标。在这项工作中，我们使用 IMC67 基因型（传统嫁接过程中的砧木）来评估各种 SE 协议；用于诱导和表达初级胚胎发生 (PSE) 的四种培养基：诱导培养基 (INDI)、表达培养基 (INDIEXP)、初级愈伤组织诱导培养基 (PCG) 和次级愈伤组织生长培养基 (SCG)，以及两个外植体（花瓣和雄蕊）。根据愈伤组织形成、PSE 和 SSE 评估 PSE（15、25、35、45、55、65 天）和 SSE（10、20、30、40、50、70、80 天）的不同培养时间。为了适应，评估了七种基质的植物存活率。使用 INDI 中的退化雄体在 50 天时实现了 100% 的胼胝体形成，并且在 INDIexp 中每个外植体 (8) 的最大 PSE 是在 45 天时实现的。二次体细胞胚胎发生（SSE）在愈伤组织增殖（CM2）中在第30天获得最多的球状和子叶胚胎（30个）。胚胎在成熟培养基（MM6）中实现转化和发育成小植株。PSE 的外植体胚胎发生效率为 11.7，SSE 为 15.2。驯化在 70% 沙 - 30% 土壤基质中获得了 42.1% 的存活率。这项工作报告了一个完整的再生方案，通过体细胞胚胎发生直至苗圃中 IMC67 砧木基因型的植株发育；有助于标准化高质量的工厂生产系统。使用 INDI 中的退化雄体在 50 天时实现了 100% 的胼胝体形成，并且在 INDIexp 中每个外植体 (8) 的最大 PSE 是在 45 天时实现的。二次体细胞胚胎发生（SSE）在愈伤组织增殖（CM2）中在第30天获得最多的球状和子叶胚胎（30个）。胚胎在成熟培养基（MM6）中实现转化和发育成小植株。PSE 的外植体胚胎发生效率为 11.7，SSE 为 15.2。驯化在 70% 沙 - 30% 土壤基质中获得了 42.1% 的存活率。这项工作报告了一个完整的再生方案，通过体细胞胚胎发生直至苗圃中 IMC67 砧木基因型的植株发育；有助于标准化高质量的工厂生产系统。使用 INDI 中的退化雄体在 50 天时实现了 100% 的胼胝体形成，并且在 INDIexp 中每个外植体 (8) 的最大 PSE 是在 45 天时实现的。二次体细胞胚胎发生（SSE）在愈伤组织增殖（CM2）中在第30天获得最多的球状和子叶胚胎（30个）。胚胎在成熟培养基（MM6）中实现转化和发育成小植株。PSE 的外植体胚胎发生效率为 11.7，SSE 为 15.2。驯化在 70% 沙 - 30% 土壤基质中获得了 42.1% 的存活率。这项工作报告了一个完整的再生方案，通过体细胞胚胎发生直至苗圃中 IMC67 砧木基因型的植株发育；有助于标准化高质量的工厂生产系统。在 INDIexp 中，每个外植体 (8) 的最大 PSE 是在 45 天时实现的。二次体细胞胚胎发生（SSE）在愈伤组织增殖（CM2）中在第30天获得最多的球状和子叶胚胎（30个）。胚胎在成熟培养基（MM6）中实现转化和发育成小植株。PSE 的外植体胚胎发生效率为 11.7，SSE 为 15.2。驯化在 70% 沙 - 30% 土壤基质中获得了 42.1% 的存活率。这项工作报告了一个完整的再生方案，通过体细胞胚胎发生直至苗圃中 IMC67 砧木基因型的植株发育；有助于标准化高质量的工厂生产系统。在 INDIexp 中，每个外植体 (8) 的最大 PSE 是在 45 天时实现的。二次体细胞胚胎发生（SSE）在愈伤组织增殖（CM2）中在第30天获得最多的球状和子叶胚胎（30个）。胚胎在成熟培养基（MM6）中实现转化和发育成小植株。PSE 的外植体胚胎发生效率为 11.7，SSE 为 15.2。驯化在 70% 沙 - 30% 土壤基质中获得了 42.1% 的存活率。这项工作报告了一个完整的再生方案，通过体细胞胚胎发生直至苗圃中 IMC67 砧木基因型的植株发育；有助于标准化高质量的工厂生产系统。胚胎在成熟培养基（MM6）中实现转化和发育成小植株。PSE 的外植体胚胎发生效率为 11.7，SSE 为 15.2。驯化在 70% 沙 - 30% 土壤基质中获得了 42.1% 的存活率。这项工作报告了一个完整的再生方案，通过体细胞胚胎发生直至苗圃中 IMC67 砧木基因型的植株发育；有助于标准化高质量的工厂生产系统。胚胎在成熟培养基（MM6）中实现转化和发育成小植株。PSE 的外植体胚胎发生效率为 11.7，SSE 为 15.2。驯化在 70% 沙 - 30% 土壤基质中获得了 42.1% 的存活率。这项工作报告了一个完整的再生方案，通过体细胞胚胎发生直至苗圃中 IMC67 砧木基因型的植株发育；有助于标准化高质量的工厂生产系统。