Athletes abuse recombinant human erythropoietin (rhEPO) and erythropoiesis stimulating agents to increase hemoglobin mass and improve performance. To evade detection, athletes have developed sophisticated blood doping regimens, which often include rhEPO micro-dosing. Detection of these methods requires biomarkers with increased sensitivity and a sample matrix that is more amenable to frequent testing in the field. We have developed a method to measure two immature reticulocyte proteins, CD71 and ferrochelatase (FECH), and one total erythrocyte protein, Band 3, in dried blood spots (DBS). This method was tested in response to rhEPO administration after low doses, 40 IU/kg, micro-doses, 900 IU, or saline injection in 20 healthy subjects. During administration of low-dose rhEPO, the mean CD71/Band 3 and FECH/Band 3 ratio increased by 412 ± 197% and 250 ± 44%, respectively. The mean response for the current biomarker, RET%, increased by 195 ± 35%. During administration of rhEPO micro-doses, CD71/Band 3 increased to 127 ± 25% on day 35 and 139 ± 36% on day 39, while no increase was observed in RET%. After rhEPO administration, during the washout phase, mean values decreased to a minimum of 64 ± 4% and 64 ± 11% for CD71/Band 3 and RET%, respectively. However, CD71/Band 3 remained below 75% of baseline for at least 4 weeks after rhEPO injection, while RET% returned to baseline levels. The results demonstrate that immature reticulocyte proteins have a larger response to rhEPO administration than the current biomarker, RET%, and can be monitored in the DBS matrix.

中文翻译：

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跟踪未成熟的网织红细胞蛋白以改进重组人促红细胞生成素 (rhEPO) 滥用的检测

CD71/Band 3 和 FECH/Band 3 比值分别增加了 412±197% 和 250±44%。当前生物标志物 RET% 的平均响应增加了 195 ± 35%。在给予 rhEPO 微剂量期间，CD71/Band 3 在第 35 天增加到 127 ± 25%，在第 39 天增加到 139 ± 36%，而未观察到 RET% 增加。rhEPO 给药后，在洗脱阶段，CD71/Band 3 和 RET% 的平均值分别降至最低 64 ± 4% 和 64 ± 11%。然而，在注射 rhEPO 后至少 4 周内，CD71/Band 3 仍低于基线的 75%，而 RET% 恢复到基线水平。结果表明，与目前的生物标志物 RET% 相比，未成熟的网织红细胞蛋白对 rhEPO 给药的反应更大，并且可以在 DBS 矩阵中进行监测。当前生物标志物 RET% 的平均响应增加了 195 ± 35%。在给予 rhEPO 微剂量期间，CD71/Band 3 在第 35 天增加到 127 ± 25%，在第 39 天增加到 139 ± 36%，而未观察到 RET% 增加。rhEPO 给药后，在洗脱阶段，CD71/Band 3 和 RET% 的平均值分别降至最低 64 ± 4% 和 64 ± 11%。然而，在注射 rhEPO 后至少 4 周内，CD71/Band 3 仍低于基线的 75%，而 RET% 恢复到基线水平。结果表明，与目前的生物标志物 RET% 相比，未成熟的网织红细胞蛋白对 rhEPO 给药的反应更大，并且可以在 DBS 矩阵中进行监测。当前生物标志物 RET% 的平均响应增加了 195 ± 35%。在给予 rhEPO 微剂量期间，CD71/Band 3 在第 35 天增加到 127 ± 25%，在第 39 天增加到 139 ± 36%，而未观察到 RET% 增加。rhEPO 给药后，在洗脱阶段，CD71/Band 3 和 RET% 的平均值分别降至最低 64 ± 4% 和 64 ± 11%。然而，在注射 rhEPO 后至少 4 周内，CD71/Band 3 仍低于基线的 75%，而 RET% 恢复到基线水平。结果表明，与目前的生物标志物 RET% 相比，未成熟的网织红细胞蛋白对 rhEPO 给药的反应更大，并且可以在 DBS 矩阵中进行监测。而RET%没有观察到增加。rhEPO 给药后，在洗脱阶段，CD71/Band 3 和 RET% 的平均值分别降至最低 64 ± 4% 和 64 ± 11%。然而，在注射 rhEPO 后至少 4 周内，CD71/Band 3 仍低于基线的 75%，而 RET% 恢复到基线水平。结果表明，与目前的生物标志物 RET% 相比，未成熟的网织红细胞蛋白对 rhEPO 给药的反应更大，并且可以在 DBS 矩阵中进行监测。而RET%没有观察到增加。rhEPO 给药后，在洗脱阶段，CD71/Band 3 和 RET% 的平均值分别降至最低 64 ± 4% 和 64 ± 11%。然而，在注射 rhEPO 后至少 4 周内，CD71/Band 3 仍低于基线的 75%，而 RET% 恢复到基线水平。结果表明，与目前的生物标志物 RET% 相比，未成熟的网织红细胞蛋白对 rhEPO 给药的反应更大，并且可以在 DBS 矩阵中进行监测。