This study aimed to explore the effect of nesfatin-1 on cobalt chloride (CoCl2)-induced hypoxic injury in cardiomyocyte H9c2 cells. H9c2 cardiomyocytes were induced by different concentrations of CoCl2 to mimic the hypoxia condition. Cell viability was detected by MTT assay. Cell apoptosis was detected by TUNEL staining and flow cytometry. ROS production was detected using the fluorescence probe DCFH-DA. The mitochondrial membrane potential (MMP) was detected using the TMRE method. The levels of released lactate dehydrogenase (LDH), malondialdehyde (MDA), superoxide dismutase (SOD), glutathione (GSH), and catalase (CAT) were detected using the commercial kits. The protein levels of MAPK signaling members (p-JNK1/2, p-ERK1/2, and p-p38) and Notch1 signaling members (Notch1, Hes 1, and Jagged 1) were detected by Western blot. CoCl2 significantly promoted cell apoptosis, increased LDH leakage, MDA concentration, and decreased cell viability, SOD activity, GSH production, and CAT activity. CoCl2-induced hypoxic injury in H9c2 cells was partially restored by nesfatin-1 treatment. Moreover, nesfatin-1 treatment attenuated CoCl2-induced increase in ROS production and mitochondrial dysfunction, decreased mitochondrial membrane potential, Bax/Bcl-2 imbalance, as well as c-caspase-9 and c-caspase-3 levels. Moreover, nesfatin-1 treatment inhibited the activation of MAPK and Notch1 signaling pathways. Nesfatin-1 could effectively protect H9c2 cells against CoCl2-induced hypoxic injury by blocking MAPK and Notch1 signaling pathways, suggesting that nesfatin-1 might be a promising therapeutic agent for hypoxic cardiac injury.

中文翻译：

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Nesfatin-1 通过调节 MAPK 和 Notch1 信号通路保护 H9c2 心肌细胞免受氯化钴诱导的缺氧损伤

本研究旨在探讨nesfatin-1对氯化钴(CoCl2)诱导的心肌H9c2细胞缺氧损伤的影响。H9c2 心肌细胞由不同浓度的 CoCl2 诱导以模拟缺氧条件。MTT法检测细胞活力。通过TUNEL染色和流式细胞术检测细胞凋亡。使用荧光探针 DCFH-DA 检测 ROS 的产生。使用TMRE方法检测线粒体膜电位（MMP）。使用商业试剂盒检测释放的乳酸脱氢酶 (LDH)、丙二醛 (MDA)、超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽 (GSH) 和过氧化氢酶 (CAT) 的水平。通过蛋白质印迹检测 MAPK 信号成员（p-JNK1/2、p-ERK1/2 和 p-p38）和 Notch1 信号成员（Notch1、Hes 1 和 Jagged 1）的蛋白质水平。CoCl2 显着促进细胞凋亡，增加 LDH 泄漏、MDA 浓度，并降低细胞活力、SOD 活性、GSH 产生和 CAT 活性。CoCl2 诱导的 H9c2 细胞缺氧损伤通过 nesfatin-1 处理部分恢复。此外，nesfatin-1 治疗减弱了 CoCl2 诱导的 ROS 产生增加和线粒体功能障碍，降低了线粒体膜电位，Bax/Bcl-2 失衡，以及 c-caspase-9 和 c-caspase-3 水平。此外，nesfatin-1 处理抑制了 MAPK 和 Notch1 信号通路的激活。Nesfatin-1 可以通过阻断 MAPK 和 Notch1 信号通路有效保护 H9c2 细胞免受 CoCl2 诱导的缺氧损伤，表明 nesfatin-1 可能是一种有前景的缺氧心脏损伤治疗剂。MDA 浓度降低，细胞活力、SOD 活性、GSH 产生和 CAT 活性降低。CoCl2 诱导的 H9c2 细胞缺氧损伤通过 nesfatin-1 处理部分恢复。此外，nesfatin-1 治疗减弱了 CoCl2 诱导的 ROS 产生增加和线粒体功能障碍，降低了线粒体膜电位，Bax/Bcl-2 失衡，以及 c-caspase-9 和 c-caspase-3 水平。此外，nesfatin-1 处理抑制了 MAPK 和 Notch1 信号通路的激活。Nesfatin-1 可以通过阻断 MAPK 和 Notch1 信号通路有效保护 H9c2 细胞免受 CoCl2 诱导的缺氧损伤，表明 nesfatin-1 可能是一种有前景的缺氧心脏损伤治疗剂。MDA 浓度降低，细胞活力、SOD 活性、GSH 产生和 CAT 活性降低。CoCl2 诱导的 H9c2 细胞缺氧损伤通过 nesfatin-1 处理部分恢复。此外，nesfatin-1 治疗减弱了 CoCl2 诱导的 ROS 产生增加和线粒体功能障碍，降低了线粒体膜电位，Bax/Bcl-2 失衡，以及 c-caspase-9 和 c-caspase-3 水平。此外，nesfatin-1 处理抑制了 MAPK 和 Notch1 信号通路的激活。Nesfatin-1 可以通过阻断 MAPK 和 Notch1 信号通路有效保护 H9c2 细胞免受 CoCl2 诱导的缺氧损伤，表明 nesfatin-1 可能是一种有前景的缺氧心脏损伤治疗剂。CoCl2 诱导的 H9c2 细胞缺氧损伤通过 nesfatin-1 处理部分恢复。此外，nesfatin-1 治疗减弱了 CoCl2 诱导的 ROS 产生增加和线粒体功能障碍，降低了线粒体膜电位，Bax/Bcl-2 失衡，以及 c-caspase-9 和 c-caspase-3 水平。此外，nesfatin-1 处理抑制了 MAPK 和 Notch1 信号通路的激活。Nesfatin-1 可以通过阻断 MAPK 和 Notch1 信号通路有效保护 H9c2 细胞免受 CoCl2 诱导的缺氧损伤，表明 nesfatin-1 可能是一种有前景的缺氧心脏损伤治疗剂。CoCl2 诱导的 H9c2 细胞缺氧损伤通过 nesfatin-1 处理部分恢复。此外，nesfatin-1 治疗减弱了 CoCl2 诱导的 ROS 产生增加和线粒体功能障碍，降低了线粒体膜电位，Bax/Bcl-2 失衡，以及 c-caspase-9 和 c-caspase-3 水平。此外，nesfatin-1 处理抑制了 MAPK 和 Notch1 信号通路的激活。Nesfatin-1 可以通过阻断 MAPK 和 Notch1 信号通路有效保护 H9c2 细胞免受 CoCl2 诱导的缺氧损伤，表明 nesfatin-1 可能是一种有前景的缺氧心脏损伤治疗剂。Bax/Bcl-2 不平衡，以及 c-caspase-9 和 c-caspase-3 水平。此外，nesfatin-1 处理抑制了 MAPK 和 Notch1 信号通路的激活。Nesfatin-1 可以通过阻断 MAPK 和 Notch1 信号通路有效保护 H9c2 细胞免受 CoCl2 诱导的缺氧损伤，表明 nesfatin-1 可能是一种有前景的缺氧心脏损伤治疗剂。Bax/Bcl-2 不平衡，以及 c-caspase-9 和 c-caspase-3 水平。此外，nesfatin-1 处理抑制了 MAPK 和 Notch1 信号通路的激活。Nesfatin-1 可以通过阻断 MAPK 和 Notch1 信号通路有效保护 H9c2 细胞免受 CoCl2 诱导的缺氧损伤，表明 nesfatin-1 可能是一种有前景的缺氧心脏损伤治疗剂。