Adipose-derived mesenchymal stem cells (ADSC)-based therapy is an outstanding treatment strategy for ischaemic disease. However, the therapeutic efficacy of this strategy is not ideal due to the poor paracrine function and low survival rate of ADSCs in target regions. Platelet extracellular vesicles (PEVs) are nanoparticles derived from activated platelets that can participate in communication between cells. Accumulating evidence indicates that PEVs can regulate the biological functions of several cell lines. In the present study, we aimed to investigate whether PEVs can modulate the proangiogenic potential of ADSCs in vitro and in vivo. PEVs were identified using scanning electron microscope (SEM), flow cytometry (FCM) and nanoparticle tracking analysis (NTA). The CCK8 assay was performed to detect proliferation of cells. Transwell and wound healing assays were performed to verify migration capacity of cells. AnnexinV-FITC/PI apoptosis kit and live/dead assay were performed to assess ADSCs apoptosis under Cocl2-induced hypoxia condition. The underlying mechanisms by which PEVs affected ADSCs were explored using real time-PCR(RT-PCR) and Western blot. In addition, matrigel plug assays were conducted and mouse hindlimb ischaemic models were established to investigate the proangiogenic potential of PEV-treated ADSCs in vivo. We demonstrated that ADSC could internalize PEVs, which lead to a series of biological reactions. In vitro, dose-dependent effects of PEVs on ADSC proliferation, migration and antiapoptotic capacity were observed. Western blotting results suggested that multiple proteins such as ERK, AKT, FAK, Src and PLCγ1 kinase may contribute to these changes. Furthermore, PEVs induced upregulation of several growth factors expression in ADSCs and amplified the proliferation, migration and tube formation of HUVECs induced by ADSC conditioned medium (CM). In in vivo experiments, compared with control ADSCs, the injection of PEV-treated ADSCs resulted in more vascularization in matrigel plugs, attenuated tissue degeneration and increased blood flow and capillary density in ischaemic hindlimb tissues. Our data demonstrated that PEVs could enhance the proangiogenic potential of ADSCs in mouse hindlimb ischaemia. The major mechanisms of this effect included the promotion of ADSC proliferation, migration, anti-apoptosis ability and paracrine secretion.

中文翻译：

---

血小板细胞外囊泡在体内和体外增强脂肪干细胞的促血管生成潜力

基于脂肪间充质干细胞 (ADSC) 的疗法是一种出色的缺血性疾病治疗策略。然而，由于靶区ADSCs的旁分泌功能差和存活率低，该策略的治疗效果并不理想。血小板细胞外囊泡 (PEV) 是源自活化血小板的纳米颗粒，可参与细胞之间的通讯。越来越多的证据表明 PEV 可以调节多种细胞系的生物学功能。在本研究中，我们旨在研究 PEVs 是否可以在体外和体内调节 ADSCs 的促血管生成潜力。使用扫描电子显微镜 (SEM)、流式细胞术 (FCM) 和纳米粒子追踪分析 (NTA) 鉴定 PEV。进行CCK8测定以检测细胞增殖。进行 Transwell 和伤口愈合试验以验证细胞的迁移能力。进行AnnexinV-FITC/PI凋亡试剂盒和活/死实验以评估Cocl2诱导的缺氧条件下ADSCs的凋亡。使用实时 PCR (RT-PCR) 和蛋白质印迹探索 PEVs 影响 ADSCs 的潜在机制。此外，还进行了基质胶塞试验，并建立了小鼠后肢缺血模型，以研究 PEV 处理的 ADSC 体内促血管生成潜力。我们证明了 ADSC 可以内化 PEV，从而导致一系列生物反应。在体外，观察到 PEV 对 ADSC 增殖、迁移和抗细胞凋亡能力的剂量依赖性影响。蛋白质印迹结果表明，ERK、AKT、FAK、Src 和 PLCγ1 激酶等多种蛋白质可能导致这些变化。此外，PEV 诱导 ADSC 中几种生长因子表达的上调，并放大了 ADSC 条件培养基 (CM) 诱导的 HUVEC 的增殖、迁移和管形成。在体内实验中，与对照 ADSCs 相比，注射 PEV 处理的 ADSCs 导致基质胶栓中更多的血管化，减轻组织变性并增加缺血后肢组织的血流量和毛细血管密度。我们的数据表明 PEVs 可以增强 ADSCs 在小鼠后肢缺血中的促血管生成潜力。这种作用的主要机制包括促进ADSC增殖、迁移、抗凋亡能力和旁分泌。ADSC 条件培养基 (CM) 诱导的 HUVEC 迁移和管形成。在体内实验中，与对照 ADSCs 相比，注射 PEV 处理的 ADSCs 导致基质胶栓中更多的血管化，减轻组织变性并增加缺血后肢组织的血流量和毛细血管密度。我们的数据表明 PEVs 可以增强 ADSCs 在小鼠后肢缺血中的促血管生成潜力。这种作用的主要机制包括促进ADSC增殖、迁移、抗凋亡能力和旁分泌。ADSC 条件培养基 (CM) 诱导的 HUVEC 迁移和管形成。在体内实验中，与对照 ADSCs 相比，注射 PEV 处理的 ADSCs 导致基质胶栓中更多的血管化，减轻组织变性并增加缺血后肢组织的血流量和毛细血管密度。我们的数据表明 PEVs 可以增强 ADSCs 在小鼠后肢缺血中的促血管生成潜力。这种作用的主要机制包括促进ADSC增殖、迁移、抗凋亡能力和旁分泌。减轻组织变性并增加缺血后肢组织的血流量和毛细血管密度。我们的数据表明 PEVs 可以增强 ADSCs 在小鼠后肢缺血中的促血管生成潜力。这种作用的主要机制包括促进ADSC增殖、迁移、抗凋亡能力和旁分泌。减轻组织变性并增加缺血后肢组织的血流量和毛细血管密度。我们的数据表明 PEVs 可以增强 ADSCs 在小鼠后肢缺血中的促血管生成潜力。这种作用的主要机制包括促进ADSC增殖、迁移、抗凋亡能力和旁分泌。