BACKGROUND Increased expression of fibroblast activation protein (FAP) is characteristic for several cancer types including human glioblastomas (GBM). FAP is expressed on both cancer as well as stromal cells which were demonstrated in extracranial tumors to maintain a microenvironment permissive for tumor growth and thus to contribute to tumor progression. FAP is considered a potential diagnostic and therapeutic target and several approaches for its targeting have been recently developed. In this work, we investigated the role of FAP+ stromal cells in glioblastoma angiogenesis. MATERIAL AND METHODS Expression of FAP and other phenotypic markers was assessed by immunocytochemistry and immunohistochemistry. FAP+ stromal cells and primary microvascular endothelial cells were isolated using magnetic activated cell sorting (MACS). Genetic aberrations were assayed by comparative genomic hybridization/single-nucleotide polymorphism analysis. Angiogenesis was evaluated using a 3D spheroid-based sprouting assay and a chorioallantoic membrane assay. A cytokine array was used to analyze soluble mediators released by FAP+ stromal cells. RESULTS FAP+ stromal cells were predominantly localized around activated CD105+ endothelial cells and their quantity positively correlated with glioblastoma vascularization. FAP+ stromal cells derived from human GBMs had a mesenchymal phenotype, were non-tumorigenic and in most cases lacked cytogenetic aberrations characteristic of GBMs. Conditioned media derived from FAP+ stromal cells induced angiogenic sprouting of both macrovascular HUVEC as well as microvascular primary endothelial cells derived from human GBMs. In a chorioallantoic membrane assay, admixture of FAP+ stromal cells to glioma cells was associated with increased angiogenesis and more frequent occurrence of hemorrhages. Cytokine array revealed a significant disbalance between several proangiogenic and antiangiogenic mediators compared to normal pericytes, and an increased Angiopoietin 2/1 ratio in conditioned media from FAP+ stromal cells. CONCLUSION Our results bring new evidence that GBM associated FAP+ stromal cell promote angiogenesis by changing the balance between proangiogenic and antiangiogenic mediators and thus they may contribute to glioblastoma progression. ACKNOWLEDGEMENT Supported by Progres Q28/1LFUK and grant LM2015064 of the EATRIS-CZ and the Center for Tumor Ecology (CZ.02.1.01/0.0/0.0/16_019/0000785).

中文翻译：

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P16.12 来自人胶质母细胞瘤的成纤维细胞活化蛋白阳性基质细胞的促血管生成作用

背景成纤维细胞活化蛋白(FAP)的表达增加是包括人胶质母细胞瘤(GBM)在内的几种癌症类型的特征。FAP 在癌症和基质细胞上都有表达，这些细胞在颅外肿瘤中被证明可以维持允许肿瘤生长的微环境，从而促进肿瘤进展。FAP 被认为是一种潜在的诊断和治疗靶点，并且最近开发了几种针对其靶向的方法。在这项工作中，我们研究了 FAP+ 基质细胞在胶质母细胞瘤血管生成中的作用。材料和方法 FAP 和其他表型标志物的表达通过免疫细胞化学和免疫组织化学进行评估。使用磁激活细胞分选 (MACS) 分离 FAP+ 基质细胞和原代微血管内皮细胞。通过比较基因组杂交/单核苷酸多态性分析测定遗传畸变。使用基于 3D 球体的发芽试验和绒毛尿囊膜试验评估血管生成。细胞因子阵列用于分析 FAP+ 基质细胞释放的可溶性介质。结果 FAP+ 基质细胞主要位于活化的 CD105+ 内皮细胞周围，其数量与胶质母细胞瘤血管形成正相关。源自人类 GBM 的 FAP+ 基质细胞具有间充质表型，无致瘤性，并且在大多数情况下缺乏 GBM 的细胞遗传学异常特征。源自 FAP+ 基质细胞的条件培养基可诱导大血管 HUVEC 以及源自人类 GBM 的微血管原代内皮细胞的血管生成萌芽。在绒毛尿囊膜测定中，FAP+ 基质细胞与神经胶质瘤细胞的混合物与血管生成增加和出血发生率增加有关。细胞因子阵列显示，与正常周细胞相比，几种促血管生成和抗血管生成介质之间存在显着不平衡，并且来自 FAP+ 基质细胞的条件培养基中血管生成素 2/1 比率增加。结论 我们的结果带来了新的证据，表明 GBM 相关的 FAP+ 基质细胞通过改变促血管生成和抗血管生成介质之间的平衡来促进血管生成，因此它们可能有助于胶质母细胞瘤的进展。致谢 由 Progres Q28/1LFUK 支持并授予 EATRIS-CZ 和肿瘤生态学中心的 LM2015064 (CZ.02.1.01/0.0/0.0/16_019/0000785)。FAP+ 基质细胞与胶质瘤细胞的混合物与增加的血管生成和更频繁的出血发生有关。细胞因子阵列显示，与正常周细胞相比，几种促血管生成和抗血管生成介质之间存在显着不平衡，并且来自 FAP+ 基质细胞的条件培养基中血管生成素 2/1 比率增加。结论 我们的结果带来了新的证据，表明 GBM 相关的 FAP+ 基质细胞通过改变促血管生成和抗血管生成介质之间的平衡来促进血管生成，因此它们可能有助于胶质母细胞瘤的进展。致谢 由 Progres Q28/1LFUK 支持并授予 EATRIS-CZ 和肿瘤生态学中心的 LM2015064 (CZ.02.1.01/0.0/0.0/16_019/0000785)。FAP+ 基质细胞与胶质瘤细胞的混合物与增加的血管生成和更频繁的出血发生有关。细胞因子阵列显示，与正常周细胞相比，几种促血管生成和抗血管生成介质之间存在显着不平衡，并且来自 FAP+ 基质细胞的条件培养基中血管生成素 2/1 比率增加。结论 我们的结果带来了新的证据，表明 GBM 相关的 FAP+ 基质细胞通过改变促血管生成和抗血管生成介质之间的平衡来促进血管生成，因此它们可能有助于胶质母细胞瘤的进展。致谢 由 Progres Q28/1LFUK 支持并授予 EATRIS-CZ 和肿瘤生态学中心的 LM2015064 (CZ.02.1.01/0.0/0.0/16_019/0000785)。细胞因子阵列显示，与正常周细胞相比，几种促血管生成和抗血管生成介质之间存在显着不平衡，并且来自 FAP+ 基质细胞的条件培养基中血管生成素 2/1 比率增加。结论 我们的结果带来了新的证据，表明 GBM 相关的 FAP+ 基质细胞通过改变促血管生成和抗血管生成介质之间的平衡来促进血管生成，因此它们可能有助于胶质母细胞瘤的进展。致谢 由 Progres Q28/1LFUK 支持并授予 EATRIS-CZ 和肿瘤生态学中心的 LM2015064 (CZ.02.1.01/0.0/0.0/16_019/0000785)。细胞因子阵列显示，与正常周细胞相比，几种促血管生成和抗血管生成介质之间存在显着不平衡，并且来自 FAP+ 基质细胞的条件培养基中血管生成素 2/1 比率增加。结论 我们的结果带来了新的证据，表明 GBM 相关的 FAP+ 基质细胞通过改变促血管生成和抗血管生成介质之间的平衡来促进血管生成，因此它们可能有助于胶质母细胞瘤的进展。致谢 由 Progres Q28/1LFUK 支持并授予 EATRIS-CZ 和肿瘤生态学中心的 LM2015064 (CZ.02.1.01/0.0/0.0/16_019/0000785)。结论 我们的结果带来了新的证据，表明 GBM 相关的 FAP+ 基质细胞通过改变促血管生成和抗血管生成介质之间的平衡来促进血管生成，因此它们可能有助于胶质母细胞瘤的进展。致谢 由 Progres Q28/1LFUK 支持并授予 EATRIS-CZ 和肿瘤生态学中心的 LM2015064 (CZ.02.1.01/0.0/0.0/16_019/0000785)。结论 我们的结果带来了新的证据，表明 GBM 相关的 FAP+ 基质细胞通过改变促血管生成和抗血管生成介质之间的平衡来促进血管生成，因此它们可能有助于胶质母细胞瘤的进展。致谢 由 Progres Q28/1LFUK 支持并授予 EATRIS-CZ 和肿瘤生态学中心的 LM2015064 (CZ.02.1.01/0.0/0.0/16_019/0000785)。