Transient receptor potential (TRP) cation channels, which are conserved across mammals, flies, fish, sea squirts, worms, and fungi, essentially contribute to cellular Ca2+ signaling. The activity of the unique TRP channel in yeast, TRP yeast channel 1 (TRPY1), relies on the vacuolar and cytoplasmic Ca2+ concentration. However, the mechanism(s) of Ca2+-dependent regulation of TRPY1 and possible contribution(s) of Ca2+-binding proteins are yet not well understood. Our results demonstrate a Ca2+-dependent binding of yeast calmodulin (CaM) to TRPY1. TRPY1 activity was increased in the cmd1-6 yeast strain, carrying a non-Ca2+-binding CaM mutant, compared with the parent strain expressing wt CaM (Cmd1). Expression of Cmd1 in cmd1-6 yeast rescued the wt phenotype. In addition, in human embryonic kidney 293 cells, hypertonic shock-induced TRPY1-dependent Ca2+ influx and Ca2+ release were increased by the CaM antagonist ophiobolin A. We found that coexpression of mammalian CaM impeded the activity of TRPY1 by reinforcing effects of endogenous CaM. Finally, inhibition of TRPY1 by Ca2+-CaM required the cytoplasmic amino acid stretch E33-Y92. In summary, our results show that TRPY1 is under inhibitory control of Ca2+-CaM and that mammalian CaM can replace yeast CaM for this inhibition. These findings add TRPY1 to the innumerable cellular proteins, which include a variety of ion channels, that use CaM as a constitutive or dissociable Ca2+-sensing subunit, and contribute to a better understanding of the modulatory mechanisms of Ca2+-CaM.

中文翻译：

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酵母液泡 TRP 通道 TRPY1 的活性受到 Ca2+-钙调蛋白结合的抑制。

瞬态受体电位 (TRP) 阳离子通道在哺乳动物、苍蝇、鱼、海鞘、蠕虫和真菌中都是保守的，基本上有助于细胞 Ca2+ 信号传导。酵母中独特的 TRP 通道 TRP 酵母通道 1 (TRPY1) 的活性取决于液泡和细胞质 Ca2+ 浓度。然而，TRPY1 的 Ca2+ 依赖性调节机制和 Ca2+ 结合蛋白的可能贡献尚不清楚。我们的结果表明酵母钙调蛋白 (CaM) 与 TRPY1 的 Ca2+ 依赖性结合。与表达 wt CaM (Cmd1) 的亲本菌株相比，携带非 Ca2+ 结合 CaM 突变体的 cmd1-6 酵母菌株中的 TRPY1 活性增加。Cmd1 在 cmd1-6 酵母中的表达挽救了 wt 表型。此外，在人胚肾293细胞中，CaM 拮抗剂 ophiobolin A 增加了高渗休克诱导的 TRPY1 依赖性 Ca2+ 流入和 Ca2+ 释放。我们发现哺乳动物 CaM 的共表达通过内源性 CaM 的增强作用阻碍了 TRPY1 的活性。最后，Ca2+-CaM 对 TRPY1 的抑制需要细胞质氨基酸伸展 E33-Y92。总之，我们的结果表明 TRPY1 受到 Ca2+-CaM 的抑制控制，并且哺乳动物 CaM 可以替代酵母 CaM 进行这种抑制。这些发现将 TRPY1 添加到无数细胞蛋白中，其中包括各种离子通道，这些蛋白使用 CaM 作为组成型或可分离 Ca2+ 感应亚基，并有助于更好地了解 Ca2+-CaM 的调节机制。我们发现哺乳动物 CaM 的共表达通过内源性 CaM 的增强作用阻碍了 TRPY1 的活性。最后，Ca2+-CaM 对 TRPY1 的抑制需要细胞质氨基酸伸展 E33-Y92。总之，我们的结果表明 TRPY1 受到 Ca2+-CaM 的抑制控制，并且哺乳动物 CaM 可以替代酵母 CaM 进行这种抑制。这些发现将 TRPY1 添加到无数细胞蛋白中，其中包括各种离子通道，这些蛋白使用 CaM 作为组成型或可分离 Ca2+ 感应亚基，并有助于更好地了解 Ca2+-CaM 的调节机制。我们发现哺乳动物 CaM 的共表达通过内源性 CaM 的增强作用阻碍了 TRPY1 的活性。最后，Ca2+-CaM 对 TRPY1 的抑制需要细胞质氨基酸伸展 E33-Y92。总之，我们的结果表明 TRPY1 受到 Ca2+-CaM 的抑制控制，并且哺乳动物 CaM 可以替代酵母 CaM 进行这种抑制。这些发现将 TRPY1 添加到无数细胞蛋白中，其中包括各种离子通道，这些蛋白使用 CaM 作为组成型或可分离 Ca2+ 感应亚基，并有助于更好地了解 Ca2+-CaM 的调节机制。我们的结果表明 TRPY1 受到 Ca2+-CaM 的抑制控制，并且哺乳动物 CaM 可以替代酵母 CaM 进行这种抑制。这些发现将 TRPY1 添加到无数细胞蛋白中，其中包括各种离子通道，这些蛋白使用 CaM 作为组成型或可分离 Ca2+ 感应亚基，并有助于更好地了解 Ca2+-CaM 的调节机制。我们的结果表明 TRPY1 受到 Ca2+-CaM 的抑制控制，并且哺乳动物 CaM 可以替代酵母 CaM 进行这种抑制。这些发现将 TRPY1 添加到无数细胞蛋白中，其中包括各种离子通道，这些蛋白使用 CaM 作为组成型或可分离 Ca2+ 感应亚基，并有助于更好地了解 Ca2+-CaM 的调节机制。