The association of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) and epithelial sodium channel (ENaC) in the pathophysiology of cystic fibrosis (CF) is controversial. Previously, we demonstrated a close physical association between wild type (WT) CFTR and WT ENaC. We have also shown that the F508del CFTR fails to associate with ENaC unless the mutant protein is rescued pharmacologically or by low temperature. In this study, we present the evidence for a direct physical association between WT CFTR and ENaC subunits carrying Liddle's syndrome mutations. We show that all three ENaC subunits bearing Liddle's syndrome mutations (both point mutations and the complete truncation of the carboxy terminus), could be co-immunoprecipitated with WT CFTR. The biochemical studies were complemented by fluorescence lifetime imaging microscopy (FLIM), a distance-dependent approach that monitors protein-protein interactions between fluorescently labeled molecules. Our measurements revealed significantly increased FRET between CFTR and all tested ENaC combinations as compared to controls (ECFP and EYFP co-transfected cells). Our findings are consistent with the notion that CFTR and ENaC are within reach of each other even in the setting of Liddle's syndrome mutations, suggestive of a direct intermolecular interaction between these two proteins.

中文翻译：

---

囊性纤维化跨膜电导调节剂与携带 Liddle 综合征突变的上皮钠通道亚基的关联

囊性纤维化跨膜电导调节剂 (CFTR) 和上皮钠通道 (ENaC) 在囊性纤维化 (CF) 的病理生理学中的关联是有争议的。以前，我们证明了野生型 (WT) CFTR 和 WT ENaC 之间的密切物理关联。我们还表明 F508del CFTR 不能与 ENaC 结合，除非突变蛋白通过药理学或低温拯救。在这项研究中，我们提供了 WT CFTR 和携带 Liddle 综合征突变的 ENaC 亚基之间直接物理关联的证据。我们表明，所有三个带有 Liddle 综合征突变的 ENaC 亚基（点突变和羧基末端的完全截断）都可以与 WT CFTR 共免疫沉淀。生化研究得到了荧光寿命成像显微镜 (FLIM) 的补充，这是一种距离依赖性方法，可监测荧光标记分子之间的蛋白质-蛋白质相互作用。我们的测量显示，与对照（ECFP 和 EYFP 共转染的细胞）相比，CFTR 和所有测试的 ENaC 组合之间的 FRET 显着增加。我们的研究结果与 CFTR 和 ENaC 即使在 Liddle 综合征突变的情况下也可以相互接触的概念一致，这表明这两种蛋白质之间存在直接的分子间相互作用。我们的测量显示，与对照（ECFP 和 EYFP 共转染的细胞）相比，CFTR 和所有测试的 ENaC 组合之间的 FRET 显着增加。我们的研究结果与 CFTR 和 ENaC 即使在 Liddle 综合征突变的情况下也可以相互接触的概念一致，这表明这两种蛋白质之间存在直接的分子间相互作用。我们的测量显示，与对照（ECFP 和 EYFP 共转染的细胞）相比，CFTR 和所有测试的 ENaC 组合之间的 FRET 显着增加。我们的研究结果与 CFTR 和 ENaC 即使在 Liddle 综合征突变的情况下也可以相互接触的概念一致，这表明这两种蛋白质之间存在直接的分子间相互作用。