In order to contribute to the scientific research on the severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS‐CoV‐2), we have investigated the isoelectric points (pI) of several related proteins, which are commercially available: the receptor‐binding domain (RBD) with His‐ and Fc‐tag, the S1 subunit with His‐tag, the S1/S2 subunits with His‐tag and the human angiotensin‐converting enzyme 2 (hACE2) with His‐tag. First, the theoretical pI values, based on the amino acid (AA) sequences of the proteins, were calculated using the ProtParam tool from the Bioinformatics Resource Portal ExPASy. The proteins were then measured with the Maurice imaged CIEF system (native fluorescence detection), testing various measurement conditions, such as different ampholytes or ampholyte mixtures. Due to isoforms, we get sections with several peaks and not just one peak for each protein. The determined pI range for the RBD/Fc is 8.24–9.32 (theoretical pI: 8.55), for the RBD/His it is 7.36–9.88 (8.91) and for the S1/His it is 7.30–8.37 (7.80). The pI range of the S1/S2/His is 4.41–5.87 (no theoretical pI, AA sequence unknown) and for hACE2/His, the determined global range is 5.19–6.11 (5.60) for all experimental conditions chosen. All theoretically derived values were found within these ranges, usually close to the center. Therefore, we consider theoretical values as useful to make predictions about the isoelectric points of SARS‐CoV‐2 proteins. The experimental conditions had only a minor influence on the pI ranges obtained and mainly influenced the peak shapes.

中文翻译：

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通过成像CIEF对市售SARS‐CoV‐2蛋白和hACE2受体进行等电点测定

为了促进对严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2（SARS-CoV-2）的科学研究，我们研究了几种相关蛋白质的等电点（pI），这些蛋白质可商购获得：受体结合域（RBD） ）带有His-和Fc-tag，带有His-tag的S1亚基，带有His-tag的S1 / S2亚基和带有His-tag的人血管紧张素转化酶2（hACE2）。首先，使用来自生物信息资源门户网站ExPASy的ProtParam工具计算基于蛋白质氨基酸（AA）序列的理论pI值。然后使用Maurice成像CIEF系统（天然荧光检测）测量蛋白质，测试各种测量条件，例如不同的两性电解质或两性电解质混合物。由于亚型，我们得到的切片具有多个峰，而每种蛋白质不仅有一个峰。确定的RBD / Fc的pI范围是8.24-9.32（理论pI：8.55），RBD / His的pI范围是7.36-9.88（8.91），S1 / His的pI范围是7.30-8.37（7.80）。S1 / S2 / His的pI范围为4.41-5.87（无理论pI，AA序列未知），对于hACE2 / His，在所有选择的实验条件下，确定的总体范围为5.19-6.11（5.60）。在这些范围内，通常是在中心附近，都找到了所有理论上得出的值。因此，我们认为理论值对预测SARS-CoV-2蛋白的等电点很有用。实验条件对获得的pI范围影响很小，主要影响峰形。RBD / His为7.36–9.88（8.91），S1 / His为7.30–8.37（7.80）。S1 / S2 / His的pI范围为4.41-5.87（无理论pI，AA序列未知），对于hACE2 / His，在所有选择的实验条件下，确定的总体范围为5.19-6.11（5.60）。在这些范围内，通常是在中心附近，都找到了所有理论上得出的值。因此，我们认为理论值对预测SARS-CoV-2蛋白的等电点很有用。实验条件对获得的pI范围影响很小，主要影响峰形。RBD / His为7.36–9.88（8.91），S1 / His为7.30–8.37（7.80）。S1 / S2 / His的pI范围为4.41-5.87（无理论pI，AA序列未知），对于hACE2 / His，在所有选择的实验条件下，确定的总体范围为5.19-6.11（5.60）。在这些范围内（通常靠近中心）找到了所有理论得出的值。因此，我们认为理论值对预测SARS-CoV-2蛋白的等电点很有用。实验条件对获得的pI范围影响很小，主要影响峰形。60）对于所有选择的实验条件。在这些范围内，通常是在中心附近，都找到了所有理论上得出的值。因此，我们认为理论值对预测SARS-CoV-2蛋白的等电点很有用。实验条件对获得的pI范围影响很小，主要影响峰形。60）对于所有选择的实验条件。在这些范围内，通常是在中心附近，都找到了所有理论上得出的值。因此，我们认为理论值对预测SARS-CoV-2蛋白的等电点很有用。实验条件对获得的pI范围影响很小，主要影响峰形。