Novel illicit benzodiazepines are among the most active areas of new illicit drug manufacture and use. We describe a method for the detection and quantification of etizolam and its metabolite α-hydroxyetizolam, flubromazolam, clonazolam, diclazepam, delorazepam, bromazepam, flubromazepam, phenazepam, flualprazolam, flunitrazolam, and nitrazolam in human whole blood. After addition of internal standards, samples are buffered and extracted using a liquid–liquid extraction. Analysis is performed using positive-ion electrospray tandem mass spectrometry for detection and quantitation. Calibration ranges were established based on the method performance and differed from compound to compound. Replicates at the lowest calibration point for each compound performed within 5% of CV (Coefficient of Variation). The correlation coefficient was >0.990 for all compounds. Relative standard deviation for all compounds was ≤10% of CV and accuracy was ±10% for both within- and between-run experiments. The maximum average intra- and inter-run imprecision were 5.7%. The maximum average intra- and inter-run imprecision was −8.7%. As part of evaluating the scope for relevancy, samples testing positive in immunoassay but confirmed to be negative in traditional benzodiazepine confirmation method were re-analyzed using this method. The presence of at least one novel benzodiazepine was identified in 70% of these samples. The appearance of these novel “designer” benzodiazepines demonstrates the challenge for toxicology testing and the need for continually updated confirmation methods.

中文翻译：

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通过 LC-MS-MS 开发和验证新型设计苯二氮卓类药物组

新型非法苯二氮卓类药物是新型非法药物制造和使用最活跃的领域之一。我们描述了一种检测和量化人体全血中依替唑仑及其代谢物 α-羟基依替唑仑、氟溴唑仑、氯硝唑仑、地西西泮、地洛西泮、溴西泮、氟溴西泮、非那西泮、氟阿普唑仑、氟硝唑仑和硝唑仑的方法。添加内标后，使用液-液萃取对样品进行缓冲和萃取。使用用于检测和定量的正离子电喷雾串联质谱进行分析。校准范围是根据方法性能确定的，并且因化合物而异。在 CV（变异系数）的 5% 范围内执行的每种化合物的最低校准点重复。相关系数＞0。所有化合物均为 990。所有化合物的相对标准偏差≤CV 的 10%，运行内和运行间实验的准确度均为 ±10%。最大平均运行内和运行间不精确度为 5.7%。最大平均运行内和运行间不精确度为 -8.7%。作为评估相关性范围的一部分，使用该方法重新分析在免疫测定中检测为阳性但在传统苯二氮卓确认方法中确认为阴性的样品。在这些样品中的 70% 中发现了至少一种新型苯二氮卓类药物的存在。这些新型“设计”苯二氮卓类药物的出现表明毒理学测试的挑战以及对不断更新的确认方法的需求。所有化合物的相对标准偏差≤CV 的 10%，运行内和运行间实验的准确度均为 ±10%。最大平均运行内和运行间不精确度为 5.7%。最大平均运行内和运行间不精确度为 -8.7%。作为评估相关性范围的一部分，使用该方法重新分析在免疫测定中检测为阳性但在传统苯二氮卓确认方法中确认为阴性的样品。在这些样品中的 70% 中发现了至少一种新型苯二氮卓类药物的存在。这些新型“设计”苯二氮卓类药物的出现表明毒理学测试的挑战以及对不断更新的确认方法的需求。所有化合物的相对标准偏差≤CV 的 10%，运行内和运行间实验的准确度均为 ±10%。最大平均运行内和运行间不精确度为 5.7%。最大平均运行内和运行间不精确度为 -8.7%。作为评估相关性范围的一部分，使用该方法重新分析在免疫测定中检测为阳性但在传统苯二氮卓确认方法中确认为阴性的样品。在这些样品中的 70% 中发现了至少一种新型苯二氮卓类药物的存在。这些新型“设计”苯二氮卓类药物的出现表明毒理学测试的挑战以及对不断更新的确认方法的需求。7%。作为评估相关性范围的一部分，使用该方法重新分析在免疫测定中检测为阳性但在传统苯二氮卓确认方法中确认为阴性的样品。在这些样品中的 70% 中发现了至少一种新型苯二氮卓类药物的存在。这些新型“设计”苯二氮卓类药物的出现表明毒理学测试的挑战以及对不断更新的确认方法的需求。7%。作为评估相关性范围的一部分，使用该方法重新分析在免疫测定中检测为阳性但在传统苯二氮卓确认方法中确认为阴性的样品。在这些样品中的 70% 中发现了至少一种新型苯二氮卓类药物的存在。这些新型“设计”苯二氮卓类药物的出现表明毒理学测试的挑战以及对不断更新的确认方法的需求。