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GAD65Cre drives reporter expression in multiple taste cell types
bioRxiv - Neuroscience Pub Date : 2021-01-17 , DOI: 10.1101/2021.01.14.426727 Eric D. Larson , Aurelie Vandenbeuch , Catherine B. Anderson , Sue C. Kinnamon
bioRxiv - Neuroscience Pub Date : 2021-01-17 , DOI: 10.1101/2021.01.14.426727 Eric D. Larson , Aurelie Vandenbeuch , Catherine B. Anderson , Sue C. Kinnamon
In taste buds, Type I cells represent the majority of cells (50-60%) and primarily have a glial-like function in taste buds. However, recent studies suggest that they have additional sensory and signaling functions including amiloride-sensitive salt transduction, oxytocin modulation of taste, and substance P mediated GABA release. Nonetheless, the overall function of Type I cells in transduction and signaling remains unclear, primarily because of the lack of a reliable reporter for this cell type. GAD65 expression is specific to Type I taste cells and GAD65 has been used as a Cre driver to study Type I cells in salt taste transduction. To test the specificity of transgene-driven expression, we crossed GAD65Cre mice with floxed tdTomato and Channelrhodopsin (ChR2) lines and examined the progeny with immunochemistry, chorda tympani recording, and calcium imaging. We report that while many tdTomato+ taste cells express NTPDase2, a specific marker of Type I cells, we see expression of tdTomato in both Gustducin and SNAP25 positive taste cells. We also see ChR2 in cells just outside the fungiform taste buds. Chorda tympani recordings in the GAD65Cre/ChR2 mice show large responses to blue light, larger than any response to standard taste stimuli. Further, several isolated tdTomato positive taste cells responded to KCl depolarization with increases in intracellular calcium, indicating the presence of voltage-gated calcium channels. Taken together, these data suggest that GAD65Cre mice drive expression in multiple taste cell types and thus cannot be considered a reliable reporter of Type I cell function.
中文翻译:
GAD65Cre在多种味觉细胞类型中驱动报告基因表达
在味蕾中,I型细胞代表大多数细胞(50-60%),并且在味蕾中主要具有神经胶质样功能。但是,最近的研究表明,它们还具有其他感觉和信号传导功能,包括阿米洛利敏感的盐转导,催产素调节味觉以及P物质介导的GABA释放。尽管如此,I型细胞在转导和信号转导中的总体功能仍不清楚,这主要是由于缺乏这种细胞类型的可靠报道分子。GAD65表达是针对I型味觉细胞的,GAD65已被用作Cre驱动程序,用于研究盐味转导中的I型细胞。为了测试转基因驱动表达的特异性,我们将GAD65Cre小鼠与tdTomato和Channelrhodopsin(ChR2)系杂交,并通过免疫化学,Chorda tympani记录,和钙成像。我们报告说,虽然许多tdTomato +味觉细胞表达NTPDase2(I型细胞的特异性标记),但我们在Gustducin和SNAP25阳性味觉细胞中都看到了tdTomato的表达。我们还在真菌形味蕾外的细胞中看到了ChR2。GAD65Cre / ChR2小鼠中的鼓参鼓记录显示出对蓝光的大响应,大于对标准味觉刺激的任何响应。此外,几个分离的tdTomato阳性味觉细胞对KCl去极化的反应与细胞内钙的增加有关,表明存在电压门控钙通道。综上所述,这些数据表明GAD65Cre小鼠在多种味觉细胞类型中驱动表达,因此不能认为是I型细胞功能的可靠报告基因。作为I型细胞的特定标记,我们在古斯汀和SNAP25阳性味觉细胞中都看到了tdTomato的表达。我们还在真菌形味蕾外的细胞中看到了ChR2。GAD65Cre / ChR2小鼠中的鼓参鼓记录显示出对蓝光的大响应,大于对标准味觉刺激的任何响应。此外,几个分离的tdTomato阳性味觉细胞对KCl去极化的反应与细胞内钙的增加有关,表明存在电压门控钙通道。综上所述,这些数据表明GAD65Cre小鼠在多种味觉细胞类型中驱动表达,因此不能认为是I型细胞功能的可靠报告基因。作为I型细胞的特定标记,我们在古斯汀和SNAP25阳性味觉细胞中都看到了tdTomato的表达。我们还在真菌形味蕾外的细胞中看到了ChR2。GAD65Cre / ChR2小鼠中的鼓参鼓记录显示出对蓝光的大响应,大于对标准味觉刺激的任何响应。此外,几个分离的tdTomato阳性味觉细胞对KCl去极化的反应与细胞内钙的增加有关,表明存在电压门控钙通道。综上所述,这些数据表明GAD65Cre小鼠在多种味觉细胞类型中驱动表达,因此不能认为是I型细胞功能的可靠报告基因。GAD65Cre / ChR2小鼠中的鼓参鼓记录显示出对蓝光的大响应,大于对标准味觉刺激的任何响应。此外,几个分离的tdTomato阳性味觉细胞对KCl去极化的反应与细胞内钙的增加有关,表明存在电压门控钙通道。综上所述,这些数据表明GAD65Cre小鼠在多种味觉细胞类型中驱动表达,因此不能认为是I型细胞功能的可靠报告基因。GAD65Cre / ChR2小鼠中的鼓参鼓记录显示出对蓝光的大响应,大于对标准味觉刺激的任何响应。此外,几个分离的tdTomato阳性味觉细胞对KCl去极化的反应与细胞内钙的增加有关,表明存在电压门控钙通道。综上所述,这些数据表明GAD65Cre小鼠在多种味觉细胞类型中驱动表达,因此不能认为是I型细胞功能的可靠报告基因。
更新日期:2021-01-18
中文翻译:
GAD65Cre在多种味觉细胞类型中驱动报告基因表达
在味蕾中,I型细胞代表大多数细胞(50-60%),并且在味蕾中主要具有神经胶质样功能。但是,最近的研究表明,它们还具有其他感觉和信号传导功能,包括阿米洛利敏感的盐转导,催产素调节味觉以及P物质介导的GABA释放。尽管如此,I型细胞在转导和信号转导中的总体功能仍不清楚,这主要是由于缺乏这种细胞类型的可靠报道分子。GAD65表达是针对I型味觉细胞的,GAD65已被用作Cre驱动程序,用于研究盐味转导中的I型细胞。为了测试转基因驱动表达的特异性,我们将GAD65Cre小鼠与tdTomato和Channelrhodopsin(ChR2)系杂交,并通过免疫化学,Chorda tympani记录,和钙成像。我们报告说,虽然许多tdTomato +味觉细胞表达NTPDase2(I型细胞的特异性标记),但我们在Gustducin和SNAP25阳性味觉细胞中都看到了tdTomato的表达。我们还在真菌形味蕾外的细胞中看到了ChR2。GAD65Cre / ChR2小鼠中的鼓参鼓记录显示出对蓝光的大响应,大于对标准味觉刺激的任何响应。此外,几个分离的tdTomato阳性味觉细胞对KCl去极化的反应与细胞内钙的增加有关,表明存在电压门控钙通道。综上所述,这些数据表明GAD65Cre小鼠在多种味觉细胞类型中驱动表达,因此不能认为是I型细胞功能的可靠报告基因。作为I型细胞的特定标记,我们在古斯汀和SNAP25阳性味觉细胞中都看到了tdTomato的表达。我们还在真菌形味蕾外的细胞中看到了ChR2。GAD65Cre / ChR2小鼠中的鼓参鼓记录显示出对蓝光的大响应,大于对标准味觉刺激的任何响应。此外,几个分离的tdTomato阳性味觉细胞对KCl去极化的反应与细胞内钙的增加有关,表明存在电压门控钙通道。综上所述,这些数据表明GAD65Cre小鼠在多种味觉细胞类型中驱动表达,因此不能认为是I型细胞功能的可靠报告基因。作为I型细胞的特定标记,我们在古斯汀和SNAP25阳性味觉细胞中都看到了tdTomato的表达。我们还在真菌形味蕾外的细胞中看到了ChR2。GAD65Cre / ChR2小鼠中的鼓参鼓记录显示出对蓝光的大响应,大于对标准味觉刺激的任何响应。此外,几个分离的tdTomato阳性味觉细胞对KCl去极化的反应与细胞内钙的增加有关,表明存在电压门控钙通道。综上所述,这些数据表明GAD65Cre小鼠在多种味觉细胞类型中驱动表达,因此不能认为是I型细胞功能的可靠报告基因。GAD65Cre / ChR2小鼠中的鼓参鼓记录显示出对蓝光的大响应,大于对标准味觉刺激的任何响应。此外,几个分离的tdTomato阳性味觉细胞对KCl去极化的反应与细胞内钙的增加有关,表明存在电压门控钙通道。综上所述,这些数据表明GAD65Cre小鼠在多种味觉细胞类型中驱动表达,因此不能认为是I型细胞功能的可靠报告基因。GAD65Cre / ChR2小鼠中的鼓参鼓记录显示出对蓝光的大响应,大于对标准味觉刺激的任何响应。此外,几个分离的tdTomato阳性味觉细胞对KCl去极化的反应与细胞内钙的增加有关,表明存在电压门控钙通道。综上所述,这些数据表明GAD65Cre小鼠在多种味觉细胞类型中驱动表达,因此不能认为是I型细胞功能的可靠报告基因。