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Low concentration of polyethylene glycol facilitates separation of extracellular vesicles from bronchoalveolar lavage fluid
American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology ( IF 4.9 ) Pub Date : 2021-01-13 , DOI: 10.1152/ajplung.00318.2020
Heedoo Lee 1, 2 , Xue He 1 , Kareemah Ni 1 , Jonathan M Carnino 1 , Yang Jin 1
Affiliation  

Extracellular vesicles (EVs) in bodily fluids play an essential role in cell-cell crosstalk and potentially serve as novel biomarkers in "liquid biopsy". It is crucial to have a consistent, efficient, and reliable method to separate EVs from bodily fluids. Currently, there is no universally accepted, "best" method to separate EVs. Besides differential ultracentrifugation (UC), polyethylene glycol (PEG) is among the commonly used method for EV separation from bodily fluids. However, the optimal concentration of PEG to be used remains inadequately addressed. We initially observed that the concentration of PEG has a significant impact on the amount of separated EVs and EV-cargos which are recovered from bronchoalveolar lavage fluid (BALF). To determine the optimal PEG concentration to be used in EV separation from BALF, we first separated the BALF and serum from wild type C57BL/6 mice. Next, various concentrations of PEG (5, 10, and 15% PEG), a commercial kit, and UC were used to obtain EVs from BALF and serum. EVs were characterized and EV-cargo protein, RNA, and miRNA levels were determined. We found that high concentration of PEG (10% and 15%) altered various EV parameters which are frequently used in EV studies, including EV yield, purity, and morphology. Using miR-15a, -142, and -223 as examples, we found that 10% and 15% PEG robustly reduced the detected levels of EV-cargo miRNAs, compared to those in the EVs separated using UC or 5% PEG. Collectively, low-concentration of PEG facilitates the optimal BALF-EV separation.

中文翻译:

低浓度的聚乙二醇有利于从支气管肺泡灌洗液中分离细胞外囊泡

体液中的细胞外囊泡 (EV) 在细胞间串扰中发挥着重要作用,并可能作为“液体活检”中的新型生物标志物。拥有一致、有效和可靠的方法将 EV 与体液分离至关重要。目前,没有普遍接受的“最佳”方法来分离电动汽车。除了差速超速离心 (UC) 之外,聚乙二醇 (PEG) 是从体液中分离 EV 的常用方法之一。然而,要使用的 PEG 的最佳浓度仍未得到充分解决。我们最初观察到 PEG 的浓度对从支气管肺泡灌洗液 (BALF) 中回收的分离的 EV 和 EV 货物的数量有显着影响。为了确定用于从 BALF 中分离 EV 的最佳 PEG 浓度,我们首先从野生型 C57BL/6 小鼠中分离出 BALF 和血清。接下来,使用各种浓度的 PEG(5%、10% 和 15% PEG)、商业试剂盒和 UC 从 BALF 和血清中获取 EV。对 EV 进行了表征,并确定了 EV 货物蛋白、RNA 和 miRNA 的水平。我们发现高浓度的 PEG(10% 和 15%)改变了 EV 研究中经常使用的各种 EV 参数,包括 EV 产量、纯度和形态。以 miR-15a、-142 和 -223 为例,我们发现与使用 UC 或 5% PEG 分离的 EV 相比,10% 和 15% PEG 显着降低了 EV-cargo miRNA 的检测水平。总的来说,低浓度的 PEG 有助于实现最佳的 BALF-EV 分离。和 UC 用于从 BALF 和血清中获得 EV。对 EV 进行了表征,并确定了 EV 货物蛋白、RNA 和 miRNA 的水平。我们发现高浓度的 PEG(10% 和 15%)改变了 EV 研究中经常使用的各种 EV 参数,包括 EV 产量、纯度和形态。以 miR-15a、-142 和 -223 为例,我们发现与使用 UC 或 5% PEG 分离的 EV 相比,10% 和 15% PEG 显着降低了 EV-cargo miRNA 的检测水平。总的来说,低浓度的 PEG 有助于实现最佳的 BALF-EV 分离。和 UC 用于从 BALF 和血清中获得 EV。对 EV 进行了表征,并确定了 EV 货物蛋白、RNA 和 miRNA 的水平。我们发现高浓度的 PEG(10% 和 15%)改变了 EV 研究中经常使用的各种 EV 参数,包括 EV 产量、纯度和形态。以 miR-15a、-142 和 -223 为例,我们发现与使用 UC 或 5% PEG 分离的 EV 相比,10% 和 15% PEG 显着降低了 EV-cargo miRNA 的检测水平。总的来说,低浓度的 PEG 有助于实现最佳的 BALF-EV 分离。和形态。以 miR-15a、-142 和 -223 为例,我们发现与使用 UC 或 5% PEG 分离的 EV 相比,10% 和 15% PEG 显着降低了 EV-cargo miRNA 的检测水平。总的来说,低浓度的 PEG 有助于实现最佳的 BALF-EV 分离。和形态。以 miR-15a、-142 和 -223 为例,我们发现与使用 UC 或 5% PEG 分离的 EV 相比,10% 和 15% PEG 显着降低了 EV-cargo miRNA 的检测水平。总的来说,低浓度的 PEG 有助于实现最佳的 BALF-EV 分离。
更新日期:2021-01-13
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