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Immunoproteomics approach revealed elevated autoantibody levels against ANXA1 in early stage gallbladder carcinoma
BMC Cancer ( IF 3.8 ) Pub Date : 2020-12-01 , DOI: 10.1186/s12885-020-07676-6 Javed Akhtar , Ratna Priya , Vaishali Jain , Puja Sakhuja , Anil Kumar Agarwal , Surbhi Goyal , Ravindra Varma Polisetty , Ravi Sirdeshmukh , Sudeshna Kar , Poonam Gautam
BMC Cancer ( IF 3.8 ) Pub Date : 2020-12-01 , DOI: 10.1186/s12885-020-07676-6 Javed Akhtar , Ratna Priya , Vaishali Jain , Puja Sakhuja , Anil Kumar Agarwal , Surbhi Goyal , Ravindra Varma Polisetty , Ravi Sirdeshmukh , Sudeshna Kar , Poonam Gautam
Early diagnosis is important for the timely treatment of gallbladder carcinoma (GBC) patients and may lead to increased survival outcomes. Here, we have applied serological proteome analysis (SERPA), an immunoproteomics approach, for the detection of ‘tumor-associated antigens (TAAs) that elicit humoral response’ in early stage GBC patients. Total protein from pooled tumor tissue of GBC patients (n = 7) was resolved by two-dimensional gel electrophoresis (2-DE) followed by immunoblotting using pooled blood plasma from healthy volunteers (n = 11) or gallstone disease (GSD) cases (n = 11) or early stage GBC (Stage I and II) (n = 5) or GBC stage IIIA (n = 9). 2-D gel and immunoblot images were acquired and analyzed using PDQuest software to identify immunoreactive spots in GBC cases in comparison to controls. Proteins from immunoreactive spots were identified by liquid chromatography- tandem mass spectrometric analysis (LC-MS/MS). Autoantibody levels for two of the functionally relevant proteins were investigated in individual plasma samples (52 cases and 89 controls) by dot blot assay using recombinant proteins. Image analysis using PDQuest software identified 25 protein spots with significantly high or specific immunoreactivity in GBC cases. Mass spectrometric analysis of 8 corresponding protein spots showing intense immunoreactivity (based on densitometric analysis) in early stage GBC or GBC stage IIIA cases led to the identification of 27 proteins. Some of the identified proteins include ANXA1, HSPD1, CA1, CA2, ALDOA and CTSD. Among the two proteins, namely ANXA1 and HSPD1 verified using a cohort of samples, significantly elevated autoantibody levels against ANXA1 were observed in early stage GBC cases in comparison to healthy volunteers or GSD cases (unpaired t-test, p < 0.05). Receiver operating characteristic (ROC) curve analysis for ANXA1 showed an Area under the Curve (AUC) of 0.69, with 41.7% sensitivity against a specificity of 89.9% for early stage GBC. IHC analysis for ANXA1 protein showed ‘high’ expression levels in 72% of GBC cases whereas all the controls showed ‘low’ expression levels. The study suggests that the ANXA1 autoantibody levels against ANXA1 may be potentially employed for early stage detection of GBC patients. Other proteins could also be explored and verified in a large cohort of clinical samples.
中文翻译:
免疫组学方法显示早期胆囊癌中针对ANXA1的自身抗体水平升高
早期诊断对于及时治疗胆囊癌(GBC)患者很重要,并且可能导致生存期增加。在这里,我们已应用血清蛋白质组学分析(SERPA)(一种免疫蛋白质组学方法)来检测早期GBC患者中的“引发体液反应的肿瘤相关抗原(TAA)”。GBC患者(n = 7)合并肿瘤组织中的总蛋白通过二维凝胶电泳(2-DE)解析,然后使用健康志愿者(n = 11)或胆结石病(GSD)病例合并的血浆进行免疫印迹分析( n = 11)或早期GBC(I和II期)(n = 5)或GBC IIIA阶段(n = 9)。采集2-D凝胶和免疫印迹图像,并使用PDQuest软件进行分析,以鉴定与对照相比在GBC病例中的免疫反应点。通过液相色谱-串联质谱分析(LC-MS / MS)鉴定免疫反应斑点中的蛋白质。使用重组蛋白通过斑点印迹法在单个血浆样本(52例和89个对照)中研究了两种功能相关蛋白的自身抗体水平。使用PDQuest软件进行的图像分析在GBC病例中鉴定出25个具有明显较高或特异性免疫反应性的蛋白斑点。在早期GBC或GBC IIIA期病例中,对表现出强烈免疫反应性的8个相应蛋白质斑点进行了质谱分析(基于光密度分析),从而鉴定出27种蛋白质。一些鉴定出的蛋白质包括ANXA1,HSPD1,CA1,CA2,ALDOA和CTSD。在这两种蛋白质中,即使用一组样本验证的ANXA1和HSPD1,与健康志愿者或GSD病例相比,早期GBC病例观察到针对ANXA1的自身抗体水平显着升高(未配对t检验,p <0.05)。ANXA1的接收器工作特性(ROC)曲线分析显示曲线下面积(AUC)为0.69,灵敏度为41.7%,而早期GBC的特异性为89.9%。IHC分析的ANXA1蛋白在72%的GBC病例中显示“高”表达水平,而所有对照均显示“低”表达水平。研究表明,针对ANXA1的ANXA1自身抗体水平可能被用于GBC患者的早期检测。其他蛋白质也可以在大量临床样本中进行探索和验证。p <0.05)。ANXA1的接收器工作特性(ROC)曲线分析显示曲线下面积(AUC)为0.69,灵敏度为41.7%,而早期GBC的特异性为89.9%。IHC分析ANXA1蛋白在72%的GBC病例中显示“高”表达水平,而所有对照均显示“低”表达水平。研究表明,针对ANXA1的ANXA1自身抗体水平可能被用于GBC患者的早期检测。其他蛋白质也可以在大量临床样本中进行探索和验证。p <0.05)。ANXA1的接收器工作特性(ROC)曲线分析显示曲线下面积(AUC)为0.69,灵敏度为41.7%,而早期GBC的特异性为89.9%。IHC分析ANXA1蛋白在72%的GBC病例中显示“高”表达水平,而所有对照均显示“低”表达水平。研究表明,针对ANXA1的ANXA1自身抗体水平可能被用于GBC患者的早期检测。其他蛋白质也可以在大量临床样本中进行探索和验证。IHC分析ANXA1蛋白在72%的GBC病例中显示“高”表达水平,而所有对照均显示“低”表达水平。研究表明,针对ANXA1的ANXA1自身抗体水平可能被用于GBC患者的早期检测。其他蛋白质也可以在大量临床样本中进行探索和验证。IHC分析的ANXA1蛋白在72%的GBC病例中显示“高”表达水平,而所有对照均显示“低”表达水平。研究表明,针对ANXA1的ANXA1自身抗体水平可能被用于GBC患者的早期检测。其他蛋白质也可以在大量临床样本中进行探索和验证。
更新日期:2020-12-01
中文翻译:
免疫组学方法显示早期胆囊癌中针对ANXA1的自身抗体水平升高
早期诊断对于及时治疗胆囊癌(GBC)患者很重要,并且可能导致生存期增加。在这里,我们已应用血清蛋白质组学分析(SERPA)(一种免疫蛋白质组学方法)来检测早期GBC患者中的“引发体液反应的肿瘤相关抗原(TAA)”。GBC患者(n = 7)合并肿瘤组织中的总蛋白通过二维凝胶电泳(2-DE)解析,然后使用健康志愿者(n = 11)或胆结石病(GSD)病例合并的血浆进行免疫印迹分析( n = 11)或早期GBC(I和II期)(n = 5)或GBC IIIA阶段(n = 9)。采集2-D凝胶和免疫印迹图像,并使用PDQuest软件进行分析,以鉴定与对照相比在GBC病例中的免疫反应点。通过液相色谱-串联质谱分析(LC-MS / MS)鉴定免疫反应斑点中的蛋白质。使用重组蛋白通过斑点印迹法在单个血浆样本(52例和89个对照)中研究了两种功能相关蛋白的自身抗体水平。使用PDQuest软件进行的图像分析在GBC病例中鉴定出25个具有明显较高或特异性免疫反应性的蛋白斑点。在早期GBC或GBC IIIA期病例中,对表现出强烈免疫反应性的8个相应蛋白质斑点进行了质谱分析(基于光密度分析),从而鉴定出27种蛋白质。一些鉴定出的蛋白质包括ANXA1,HSPD1,CA1,CA2,ALDOA和CTSD。在这两种蛋白质中,即使用一组样本验证的ANXA1和HSPD1,与健康志愿者或GSD病例相比,早期GBC病例观察到针对ANXA1的自身抗体水平显着升高(未配对t检验,p <0.05)。ANXA1的接收器工作特性(ROC)曲线分析显示曲线下面积(AUC)为0.69,灵敏度为41.7%,而早期GBC的特异性为89.9%。IHC分析的ANXA1蛋白在72%的GBC病例中显示“高”表达水平,而所有对照均显示“低”表达水平。研究表明,针对ANXA1的ANXA1自身抗体水平可能被用于GBC患者的早期检测。其他蛋白质也可以在大量临床样本中进行探索和验证。p <0.05)。ANXA1的接收器工作特性(ROC)曲线分析显示曲线下面积(AUC)为0.69,灵敏度为41.7%,而早期GBC的特异性为89.9%。IHC分析ANXA1蛋白在72%的GBC病例中显示“高”表达水平,而所有对照均显示“低”表达水平。研究表明,针对ANXA1的ANXA1自身抗体水平可能被用于GBC患者的早期检测。其他蛋白质也可以在大量临床样本中进行探索和验证。p <0.05)。ANXA1的接收器工作特性(ROC)曲线分析显示曲线下面积(AUC)为0.69,灵敏度为41.7%,而早期GBC的特异性为89.9%。IHC分析ANXA1蛋白在72%的GBC病例中显示“高”表达水平,而所有对照均显示“低”表达水平。研究表明,针对ANXA1的ANXA1自身抗体水平可能被用于GBC患者的早期检测。其他蛋白质也可以在大量临床样本中进行探索和验证。IHC分析ANXA1蛋白在72%的GBC病例中显示“高”表达水平,而所有对照均显示“低”表达水平。研究表明,针对ANXA1的ANXA1自身抗体水平可能被用于GBC患者的早期检测。其他蛋白质也可以在大量临床样本中进行探索和验证。IHC分析的ANXA1蛋白在72%的GBC病例中显示“高”表达水平,而所有对照均显示“低”表达水平。研究表明,针对ANXA1的ANXA1自身抗体水平可能被用于GBC患者的早期检测。其他蛋白质也可以在大量临床样本中进行探索和验证。