For several decades now, the analysis of steroids has been a key tool in the diagnosis and monitoring of numerous endocrine pathologies. Thus, the available methods used to analyze steroids in biological samples have dramatically evolved over time following the rapid pace of technology and scientific knowledge. This review aims to synthetize the advances in steroids’ analysis, from classical approaches considering only a few steroids or a limited number of steroid ratios, up to the new steroid profiling strategies (steroidomics) monitoring large sets of steroids in biological matrices. In this context, the use of liquid chromatography coupled to mass spectrometry has emerged as the technique of choice for the simultaneous determination of a high number of steroids, including phase II metabolites, due to its sensitivity and robustness. However, the large dynamic range to be covered, the low natural abundance of some key steroids, the selectivity of the analytical methods, the extraction protocols, and the steroid ionization remain some of the current challenges in steroid analysis. This review provides an overview of the different analytical workflows available depending on the number of steroids under study. Special emphasis is given to sample treatment, acquisition strategy, data processing, steroid identification and quantification using LC–MS approaches. This work also outlines how the availability of steroid standards, the need for complementary analytical strategies and the improvement of calibration approaches are crucial for achieving complete steroidome quantification.

几十年来，类固醇的分析一直是诊断和监测多种内分泌病理的关键工具。因此，随着技术和科学知识的飞速发展，用于分析生物样品中类固醇的可用方法随着时间的推移而发生了巨大变化。这篇综述旨在综合类固醇分析的进展，从仅考虑几种类固醇或有限数量的类固醇比例的经典方法，到监测生物基质中大量类固醇的新类固醇分析策略（类固醇组学）。在这种情况下，由于液相色谱法与质谱联用的灵敏度和稳定性强，已成为同时测定大量类固醇（包括II期代谢物）的首选技术。然而，大的动态范围，某些关键类固醇的自然丰度低，分析方法的选择性，提取方案以及类固醇离子化仍然是类固醇分析中的当前挑战。这篇综述根据所研究的类固醇数量，概述了可用的不同分析工作流程。特别强调使用LC-MS方法进行样品处理，采集策略，数据处理，类固醇鉴定和定量。这项工作还概述了缺乏类固醇标准品，对补充分析策略的需求以及校准方法的改进对于实现完整的类固醇组定量至关重要。分析方法的选择性，提取方案以及类固醇离子化仍是类固醇分析中当前面临的一些挑战。这篇综述根据所研究的类固醇数量，概述了可用的不同分析工作流程。特别强调使用LC-MS方法进行样品处理，采集策略，数据处理，类固醇鉴定和定量。这项工作还概述了缺乏类固醇标准品，对补充分析策略的需求以及校准方法的改进对于实现完整的类固醇组定量至关重要。分析方法的选择性，提取方案以及类固醇离子化仍是类固醇分析中当前面临的一些挑战。这篇综述根据所研究的类固醇数量，概述了可用的不同分析工作流程。特别强调使用LC-MS方法进行样品处理，采集策略，数据处理，类固醇鉴定和定量。这项工作还概述了缺乏类固醇标准品，对补充分析策略的需求以及校准方法的改进对于实现完整的类固醇组定量至关重要。这篇综述根据所研究的类固醇数量，概述了可用的不同分析工作流程。特别强调使用LC-MS方法进行样品处理，采集策略，数据处理，类固醇鉴定和定量。这项工作还概述了缺乏类固醇标准品，对补充分析策略的需求以及校准方法的改进对于实现完整的类固醇组定量至关重要。这篇综述根据所研究的类固醇数量，概述了可用的不同分析工作流程。特别强调使用LC-MS方法进行样品处理，采集策略，数据处理，类固醇鉴定和定量。这项工作还概述了缺乏类固醇标准品，对补充分析策略的需求以及校准方法的改进对于实现完整的类固醇组定量至关重要。