Foot-and-mouth disease (FMD) virus 3A protein regulates viral replication and virulence; thus, we generated BHK-Flp-In cell line expressing 3A protein because it can serve as helper cell line for infecting a replication defective FMDV to produce a live disabled vaccine. FMDV Asia1 3A was amplified, cloned in pcDNA vector and confirmed by sequencing. The 3A gene was subcloned in pcEF/FRT vector and transfected in BHK-Flp-In cells and transformed cells were selected by resistance to hygromycin and susceptibility to zeocin antibiotics. The BHK-Flp-In cells expressing 3A protein was designated as Flp-In3A. Western blot and immunofluorescence confirmed that Flp-In3A cells expressed FMDV3A protein. Absolute quantitation of 3A transcripts showed peak expression at 6 h in Flp-In3A cells followed by a sharp decrease and the cells showed growth retardation for 2 h post-seeding with cytoplasmic vacuolations with advancing time. Response to infection with FMDV Asia1 virus revealed smaller plaques in Flp-In3A cells. Then, we investigated the effect of FMDV3A expression on autophagy related genes by real time PCR. Most autophagy genes were upregulated by 9 h post-seeding of which, autophagosome marker LC3B-II was demonstrated by western blot. Transient expression of 3A in PK-15 cells upregulated both Th1 and Th2 genes. The study suggested that the expressed 3A protein of FMDV cannot be used for 3A trans-supplementation in helper cells; however, it acts as an endogenously processed antigen that has the potential to elicit immune response in vivo.

口蹄疫 (FMD) 病毒 3A 蛋白调节病毒复制和毒力；因此，我们生成了表达 3A 蛋白的 BHK-Flp-In 细胞系，因为它可以作为辅助细胞系来感染复制缺陷型口蹄疫病毒以产生活疫苗。FMDV Asia1 3A 被扩增、克隆到 pcDNA 载体中并通过测序确认。将 3A 基因亚克隆到 pcEF/FRT 载体中并转染到 BHK-Flp-In 细胞中，并通过对潮霉素的抗性和对 zeocin 抗生素的敏感性来选择转化细胞。表达3A蛋白的BHK-Flp-In细胞被命名为Flp-In3A。Western印迹和免疫荧光证实Flp-In3A细胞表达FMDV3A蛋白。3A 转录物的绝对定量显示在 Flp-In3A 细胞中的 6 小时表达峰值，然后急剧下降，并且细胞在接种后 2 小时显示生长迟缓，随着时间的推移，细胞质空泡化。对 FMDV Asia1 病毒感染的反应显示 Flp-In3A 细胞中有较小的斑块。然后，我们通过实时 PCR 研究了 FMDV3A 表达对自噬相关基因的影响。大多数自噬基因在接种后 9 小时上调，其中自噬体标志物 LC3B-II 被蛋白质印迹证实。PK-15 细胞中 3A 的瞬时表达上调 Th1 和 Th2 基因。研究表明，FMDV表达的3A蛋白不能用于辅助细胞的3A反式补充；然而，它作为一种内源性加工的抗原，有可能引发免疫反应 对 FMDV Asia1 病毒感染的反应显示 Flp-In3A 细胞中有较小的斑块。然后，我们通过实时 PCR 研究了 FMDV3A 表达对自噬相关基因的影响。大多数自噬基因在接种后 9 小时上调，其中自噬体标志物 LC3B-II 被蛋白质印迹证实。PK-15 细胞中 3A 的瞬时表达上调 Th1 和 Th2 基因。研究表明，FMDV表达的3A蛋白不能用于辅助细胞的3A反式补充；然而，它作为一种内源性加工的抗原，有可能引发免疫反应 对 FMDV Asia1 病毒感染的反应显示 Flp-In3A 细胞中有较小的斑块。然后，我们通过实时 PCR 研究了 FMDV3A 表达对自噬相关基因的影响。大多数自噬基因在接种后 9 小时上调，其中自噬体标志物 LC3B-II 被蛋白质印迹证实。PK-15 细胞中 3A 的瞬时表达上调 Th1 和 Th2 基因。研究表明，FMDV表达的3A蛋白不能用于辅助细胞的3A反式补充；然而，它作为一种内源性加工的抗原，有可能引发免疫反应 自噬体标志物 LC3B-II 通过蛋白质印迹证明。PK-15 细胞中 3A 的瞬时表达上调 Th1 和 Th2 基因。研究表明，FMDV表达的3A蛋白不能用于辅助细胞的3A反式补充；然而，它作为一种内源性加工的抗原，有可能引发免疫反应 自噬体标志物 LC3B-II 通过蛋白质印迹证明。PK-15 细胞中 3A 的瞬时表达上调 Th1 和 Th2 基因。研究表明，FMDV表达的3A蛋白不能用于辅助细胞的3A反式补充；然而，它作为一种内源性加工的抗原，有可能引发免疫反应体内。