This study reported about the fabrication of dentin non-collagenous proteins (dNCPs) polyelectrolyte multilayers and evaluated its osteogenic potential. The composite sandwich structure of dNCPs polyelectrolyte multilayers was generated on the surface of polycaprolactone electrospinning membranes by the Layer-by-Layer self-assembly technique. The dNCPs-coated membranes comprised the experimental group and the non-coated membranes acted as the control. Nanofiber morphologies of both membranes were observed under scanning electron microscope. The release of dNCPs was evaluated by ELISA kit. Periodontal ligament stem cells (PDLSCs) were seeded on both membranes. The morphology changes and proliferation of cells were tested. The expressions of osteogenic-related genes and proteins were evaluated by RT-PCR, alkaline phosphatase (ALP) activity assay, and immunofluorescence staining. dNCPs-coated membranes displayed significantly different fiber morphology than the non-coated membranes. A stable release of dentin phosphoprotein was maintained from day 4 to day 15 in the experimental group. Cells on dNCPs-coated membranes were found to have cuboidal or polygonal shapes. The proliferative rate of cells was significantly lower in the experimental group from day 4 to day 9 (p<0.05). However, cells on the dNCPs-coated membranes demonstrated a significantly higher ALP content and expression levels of osteogenic gene and proteins than the controls (p<0.05). These results indicated that dNCPs polyelectrolyte multilayers could induce the osteogenic differentiation of PDLSCs in vitro.

中文翻译：

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dNCPs聚电解质多层复合夹层结构诱导PDLSCs体外成骨分化

本研究报告了牙本质非胶原蛋白 (dNCPs) 聚电解质多层膜的制备，并评估了其成骨潜力。通过逐层自组装技术在聚己内酯静电纺丝膜表面生成dNCPs聚电解质多层复合夹层结构。dNCPs 包被的膜构成实验组，未包被的膜作为对照。在扫描电子显微镜下观察两种膜的纳米纤维形态。通过ELISA试剂盒评估dNCP的释放。牙周膜干细胞 (PDLSCs) 接种在两个膜上。测试细胞的形态变化和增殖。通过RT-PCR、碱性磷酸酶（ALP）活性测定法评估成骨相关基因和蛋白质的表达，和免疫荧光染色。dNCPs 涂层的膜显示出与非涂层膜显着不同的纤维形态。实验组在第 4 天至第 15 天保持牙本质磷蛋白的稳定释放。发现 dNCP 涂层膜上的细胞具有立方体或多边形形状。从第4天到第9天，实验组的细胞增殖率显着降低（p<0.05）。然而，与对照相比，dNCP 包被膜上的细胞表现出显着更高的 ALP 含量和成骨基因和蛋白质的表达水平（p < 0.05）。这些结果表明，dNCPs 聚电解质多层膜可以在体外诱导 PDLSCs 的成骨分化。dNCPs 涂层的膜显示出与非涂层膜显着不同的纤维形态。实验组在第 4 天至第 15 天保持牙本质磷蛋白的稳定释放。发现 dNCP 涂层膜上的细胞具有立方体或多边形形状。从第4天到第9天，实验组的细胞增殖率显着降低（p<0.05）。然而，与对照相比，dNCP 包被膜上的细胞表现出显着更高的 ALP 含量和成骨基因和蛋白质的表达水平（p < 0.05）。这些结果表明，dNCPs 聚电解质多层膜可以在体外诱导 PDLSCs 的成骨分化。dNCPs 涂层的膜显示出与非涂层膜显着不同的纤维形态。实验组在第 4 天至第 15 天保持牙本质磷蛋白的稳定释放。发现 dNCP 涂层膜上的细胞具有立方体或多边形形状。从第4天到第9天，实验组的细胞增殖率显着降低（p<0.05）。然而，与对照相比，dNCP 包被膜上的细胞表现出显着更高的 ALP 含量和成骨基因和蛋白质的表达水平（p < 0.05）。这些结果表明，dNCPs 聚电解质多层膜可以在体外诱导 PDLSCs 的成骨分化。发现 dNCP 涂层膜上的细胞具有立方体或多边形形状。从第4天到第9天，实验组的细胞增殖率显着降低（p<0.05）。然而，与对照相比，dNCP 包被膜上的细胞表现出显着更高的 ALP 含量和成骨基因和蛋白质的表达水平（p < 0.05）。这些结果表明，dNCPs 聚电解质多层膜可以在体外诱导 PDLSCs 的成骨分化。发现 dNCP 涂层膜上的细胞具有立方体或多边形形状。从第4天到第9天，实验组的细胞增殖率显着降低（p<0.05）。然而，与对照相比，dNCP 包被膜上的细胞表现出显着更高的 ALP 含量和成骨基因和蛋白质的表达水平（p < 0.05）。这些结果表明，dNCPs 聚电解质多层膜可以在体外诱导 PDLSCs 的成骨分化。