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Quantitative Interactomics of Lck-TurboID in Living Human T Cells Unveils T Cell Receptor Stimulation-Induced Proximal Lck Interactors
Journal of Proteome Research ( IF 4.4 ) Pub Date : 2020-11-13 , DOI: 10.1021/acs.jproteome.0c00616
Xien Yu Chua 1 , Timothy Aballo 2 , William Elnemer 2 , Melanie Tran 2 , Arthur Salomon 2
Affiliation  

While Lck has been widely recognized to play a pivotal role in the initiation of the T cell receptor (TCR) signaling pathway, an understanding of the precise regulation of Lck in T cells upon TCR activation remains elusive. Investigation of protein–protein interaction (PPI) using proximity labeling techniques such as TurboID has the potential to provide valuable molecular insights into Lck regulatory networks. By expressing Lck-TurboID in Jurkat T cells, we have uncovered a dynamic, short-range Lck protein interaction network upon 30 min of TCR stimulation. In this novel application of TurboID, we detected 27 early signaling-induced Lck-proximal interactors in living T cells, including known and novel Lck interactors, validating the discovery power of this tool. Our results revealed previously unappreciated Lck PPI which may be associated with cytoskeletal rearrangement, ubiquitination of TCR signaling proteins, activation of the mitogen-activated protein kinase cascade, coalescence of the LAT signalosome, and formation of the immunological synapse. In this study, we demonstrated for the first time in immune cells and for the kinase Lck that TurboID can be utilized to unveil PPI dynamics in living cells at a time scale consistent with early TCR signaling. Data are available via ProteomeXchange with identifier PXD020759.

中文翻译:

Lck-TurboID 在活人 T 细胞中的定量相互作用组学揭示 T 细胞受体刺激诱导的近端 Lck 相互作用物

虽然 Lck 已被广泛认为在 T 细胞受体 (TCR) 信号通路的启动中发挥关键作用,但对 TCR 激活后 T 细胞中 Lck 的精确调节的理解仍然难以捉摸。使用邻近标记技术(如 TurboID)研究蛋白质-蛋白质相互作用 (PPI) 有可能为 Lck 调节网络提供有价值的分子见解。通过在 Jurkat T 细胞中表达 Lck-TurboID,我们在 TCR 刺激 30 分钟后发现了一个动态的、短程 Lck 蛋白相互作用网络。在 TurboID 的这个新应用中,我们在活 T 细胞中检测到 27 个早期信号诱导的 Lck 近端相互作用子,包括已知和新的 Lck 相互作用子,验证了该工具的发现能力。我们的结果揭示了以前未被重视的 Lck PPI,这可能与细胞骨架重排、TCR 信号蛋白的泛素化、丝裂原活化蛋白激酶级联的激活、LAT 信号小体的聚结以及免疫突触的形成有关。在这项研究中,我们首次在免疫细胞和激酶 Lck 中证明了 TurboID 可用于在与早期 TCR 信号一致的时间尺度上揭示活细胞中的 PPI 动态。数据可用 我们首次在免疫细胞和激酶 Lck 中证明了 TurboID 可用于在与早期 TCR 信号传导一致的时间尺度上揭示活细胞中的 PPI 动态。数据可用 我们首次在免疫细胞和激酶 Lck 中证明了 TurboID 可用于在与早期 TCR 信号传导一致的时间尺度上揭示活细胞中的 PPI 动态。数据可用通过ProteomeXchange,标识符为 PXD020759。
更新日期:2021-01-01
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