Microautophagy, which degrades cargos by direct lysosomal/vacuolar engulfment of cytoplasmic cargos, is promoted after nutrient starvation and the inactivation of target of rapamycin complex 1 (TORC1) protein kinase. In budding yeast, microautophagy has been commonly assessed using processing assays with green fluorescent protein (GFP)-tagged vacuolar membrane proteins, such as Vph1 and Pho8. The endosomal sorting complex required for transport (ESCRT) system is proposed to be required for microautophagy, because degradation of vacuolar membrane protein Vph1 was compromised in ESCRT-defective mutants. However, ESCRT is also critical for the vacuolar sorting of most vacuolar proteins, and hence reexamination of the involvement of ESCRT in microautophagic processes is required. Here, we show that the Vph1-GFP processing assay is unsuitable for estimating the involvement of ESCRT in microautophagy, because Vph1-GFP accumulated highly in the prevacuolar class E compartment in ESCRT mutants. In contrast, GFP-Pho8 and Sna4-GFP destined for vacuolar membranes via an alternative adaptor protein-3 (AP-3) pathway, were properly localized on vacuolar membranes in ESCRT-deficient cells. Nevertheless, microautophagic degradation of GFP-Pho8 and Sna4-GFP after TORC1 inactivation was hindered in ESCRT mutants, indicating that ESCRT is indeed required for microautophagy after nutrient starvation and TORC1 inactivation. These findings provide evidence for the direct role of ESCRT in microautophagy induction.

中文翻译：

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ESCRT机械在酵母的微自噬中发挥作用

在营养缺乏和雷帕霉素复合物1（TORC1）蛋白激酶靶点失活后，通过自溶性体/液泡直接吞噬细胞质货物而使货物降解的自噬作用得以提高。在发芽酵母中，通常使用带有绿色荧光蛋白（GFP）标签的液泡膜蛋白（例如Vph1和Pho8）的加工测定法来评估微自噬。有人提出运输（ESCRT）系统所需的内体分选复合物是微自噬所必需的，因为在ESCRT缺陷型突变体中液泡膜蛋白Vph1的降解受到损害。然而，ESCRT对于大多数液泡蛋白的液泡分选也至关重要，因此需要重新检查ESCRT在微自噬过程中的参与。这里，我们表明，Vph1-GFP加工检测方法不适合估计ESCRT在微自噬中的参与，因为Vph1-GFP在ESCRT突变体的前真空E类区室中高度积累。相比之下，通过备用衔接蛋白3（AP-3）途径注定液泡膜的GFP-Pho8和Sna4-GFP正确定位在ESCRT缺陷细胞的液泡膜上。然而，在ESCRT突变体中，TORC1失活后，GFP-Pho8和Sna4-GFP的微自噬降解受到阻碍，这表明在营养缺乏和TORC1失活后，微自噬确实需要ESCRT。这些发现为ESCRT在微自噬诱导中的直接作用提供了证据。因为Vph1-GFP在ESCRT突变体的前真空E类区室中高度积累。相比之下，通过备用衔接蛋白3（AP-3）途径注定液泡膜的GFP-Pho8和Sna4-GFP正确定位在ESCRT缺陷细胞的液泡膜上。然而，在ESCRT突变体中，TORC1失活后，GFP-Pho8和Sna4-GFP的微自噬降解受到阻碍，这表明在营养缺乏和TORC1失活后，微自噬确实需要ESCRT。这些发现为ESCRT在微自噬诱导中的直接作用提供了证据。因为Vph1-GFP在ESCRT突变体的前真空E类区室中高度积累。相比之下，通过备用衔接蛋白3（AP-3）途径注定液泡膜的GFP-Pho8和Sna4-GFP正确定位在ESCRT缺陷细胞的液泡膜上。然而，在ESCRT突变体中，TORC1失活后，GFP-Pho8和Sna4-GFP的微自噬降解受到阻碍，这表明在营养缺乏和TORC1失活后，微自噬确实需要ESCRT。这些发现为ESCRT在微自噬诱导中的直接作用提供了证据。在ESCRT突变体中，TORC1失活后，GFP-Pho8和Sna4-GFP的微自噬降解受到阻碍，这表明在营养缺乏和TORC1失活后，微自噬确实需要ESCRT。这些发现为ESCRT在微自噬诱导中的直接作用提供了证据。在ESCRT突变体中，TORC1失活后，GFP-Pho8和Sna4-GFP的微自噬降解受到阻碍，这表明在营养缺乏和TORC1失活后，微自噬确实需要ESCRT。这些发现为ESCRT在微自噬诱导中的直接作用提供了证据。