Abstract

MiR-145-5p is high-expressed in human vascular endothelial cells (HUVECs) and alternatively activated macrophages (M2). However, whether miR-145-5p can reduce HUVEC damage by regulating macrophage immunophenotype is less reported. THP-1 was stimulated by Phorbolate-12-myristate-13-acetate, LPS and IFN-γ, and IL-4 to differentiate into macrophages (M0, M1 and M2). The expressions of macrophage markers were detected by Western blotting, and the expressions of miR-145-5p and kruppel-like factor-14 (KLF14) were detected by qRT-PCR. Dual-luciferase reporter assay was used to analyze the targeted relationship of miR-145-5p and KLF14. HUVEC injury was induced by LPS and then co-cultured with M1 transfected by miR-145-5p mimic. The effect of miR-145-3p on proliferation and metastasis of LPS-induced HUVECs was detected by MTT, clone formation, scratch assay and Transwell. We found that the expression of miR-145-5p was higher in M2 than that in M1. MiR-145-5p expression was down-regulated during M2-to-M1, but up-regulated during M1-to-M2. The expressions of IL-1β and iNOS were down-regulated, while the protein expressions of CCL17 and Arg-1 were up-regulated by miR-145-5p mimic in M0. The viability, proliferation, migration and invasion of HUVECs were promoted, however, LDH activity of the HUVECs was inhibited by mimics. In addition, KLF14 was predicted as the target gene for miR-145-5p in HUVECs. Collectively, our results demonstrate that miR-145-5p inhibited cell proliferation of LPS-treated HUVECs possibly through regulating macrophage polarization to M2.

摘要

MiR-145-5p 在人血管内皮细胞 (HUVEC) 和活化的巨噬细胞 (M2) 中高表达。然而，关于 miR-145-5p 是否可以通过调节巨噬细胞免疫表型来减少 HUVEC 损伤的报道较少。Phorbolate-12-myristate-13-acetate、LPS 和 IFN-γ 和 IL-4 刺激 THP-1 分化为巨噬细胞（M0、M1 和 M2）。Western blotting检测巨噬细胞标志物的表达，qRT-PCR检测miR-145-5p和kruppel-like factor-14（KLF14）的表达。双荧光素酶报告基因分析用于分析miR-145-5p和KLF14的靶向关系。HUVEC损伤由LPS诱导，然后与转染miR-145-5p模拟物的M1共培养。MTT检测miR-145-3p对LPS诱导的HUVECs增殖和转移的影响 划痕试验和 Transwell。我们发现M2中miR-145-5p的表达高于M1。MiR-145-5p 表达在 M2 到 M1 期间下调，但在 M1 到 M2 期间上调。miR-145-5p mimic在M0.IL-1β和iNOS表达下调，而CCL17和Arg-1蛋白表达上调。HUVECs的活力、增殖、迁移和侵袭得到促进，而HUVECs的LDH活性受到模拟物的抑制。此外，KLF14 被预测为 HUVECs 中 miR-145-5p 的靶基因。总的来说，我们的研究结果表明，miR-145-5p 可能通过调节巨噬细胞极化至 M2 来抑制 LPS 处理的 HUVEC 的细胞增殖。MiR-145-5p 表达在 M2 到 M1 期间下调，但在 M1 到 M2 期间上调。miR-145-5p mimic在M0.IL-1β和iNOS表达下调，而CCL17和Arg-1蛋白表达上调。HUVECs的活力、增殖、迁移和侵袭得到促进，而HUVECs的LDH活性受到模拟物的抑制。此外，KLF14 被预测为 HUVECs 中 miR-145-5p 的靶基因。总的来说，我们的研究结果表明，miR-145-5p 可能通过调节巨噬细胞极化至 M2 来抑制 LPS 处理的 HUVEC 的细胞增殖。MiR-145-5p 表达在 M2 到 M1 期间下调，但在 M1 到 M2 期间上调。miR-145-5p mimic在M0.IL-1β和iNOS表达下调，而CCL17和Arg-1蛋白表达上调。HUVECs的活力、增殖、迁移和侵袭得到促进，而HUVECs的LDH活性受到模拟物的抑制。此外，KLF14 被预测为 HUVECs 中 miR-145-5p 的靶基因。总的来说，我们的研究结果表明，miR-145-5p 可能通过调节巨噬细胞极化至 M2 来抑制 LPS 处理的 HUVEC 的细胞增殖。HUVECs的迁移和侵袭得到促进，而HUVECs的LDH活性受到模拟物的抑制。此外，KLF14 被预测为 HUVECs 中 miR-145-5p 的靶基因。总的来说，我们的研究结果表明，miR-145-5p 可能通过调节巨噬细胞极化至 M2 来抑制 LPS 处理的 HUVEC 的细胞增殖。HUVECs的迁移和侵袭得到促进，而HUVECs的LDH活性受到模拟物的抑制。此外，KLF14 被预测为 HUVECs 中 miR-145-5p 的靶基因。总的来说，我们的研究结果表明，miR-145-5p 可能通过调节巨噬细胞极化至 M2 来抑制 LPS 处理的 HUVEC 的细胞增殖。