As interests increase in oligonucleotide therapeutics, there has been a greater need for analytical techniques to properly analyze and quantitate these biomolecules. This article looks into some of the existing chromatographic approaches for oligonucleotide analysis, including anion exchange, hydrophilic interaction liquid chromatography, and ion pair chromatography. Some of the key advantages and challenges of these chromatographic techniques are discussed. Colloid formation in mobile phases of alkylamines and fluorinated alcohols, a recently discovered analytical challenge, is discussed. Mass spectrometry is the method of choice to directly obtain structural information about oligonucleotide therapeutics. Mass spectrometry sensitivity challenges are reviewed, including comparison to other oligonucleotide techniques, salt adduction, and the multiple charge state envelope. Ionization of oligonucleotides through the charge residue model, ion evaporation model, and chain ejection model are analyzed. Therapeutic oligonucleotides have to undergo approval from major regulatory agencies, and the impurities and degradation products must be well-characterized to be approved. Current accepted thresholds for oligonucleotide impurities are reported. Aspects of the impurities and degradation products from these types of molecules are discussed as well as optimal analytical strategies to determine oligonucleotide related substances. Finally, ideas are proposed on how the field of oligonucleotide therapeutics may improve to aid in future analysis.

中文翻译：

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使用液相色谱-质谱法表征寡核苷酸的现状：洞察关键问题。

随着对寡核苷酸疗法的兴趣增加，越来越需要分析技术来正确分析和定量这些生物分子。本文探讨了一些现有的寡核苷酸分析色谱方法，包括阴离子交换、亲水相互作用液相色谱和离子对色谱。讨论了这些色谱技术的一些主要优势和挑战。讨论了最近发现的分析挑战——烷基胺和氟化醇流动相中的胶体形成。质谱法是直接获取有关寡核苷酸疗法的结构信息的首选方法。回顾了质谱灵敏度挑战，包括与其他寡核苷酸技术的比较、盐加成、和多电荷态包络。通过电荷残留模型、离子蒸发模型和链喷射模型分析寡核苷酸的电离。治疗性寡核苷酸必须经过主要监管机构的批准，杂质和降解产物必须经过充分表征才能获得批准。报告了目前可接受的寡核苷酸杂质阈值。讨论了来自这些类型分子的杂质和降解产物的方面，以及确定寡核苷酸相关物质的最佳分析策略。最后，提出了关于寡核苷酸治疗领域如何改进以帮助未来分析的想法。和链弹出模型进行了分析。治疗性寡核苷酸必须经过主要监管机构的批准，杂质和降解产物必须经过充分表征才能获得批准。报告了目前可接受的寡核苷酸杂质阈值。讨论了来自这些类型分子的杂质和降解产物的方面，以及确定寡核苷酸相关物质的最佳分析策略。最后，提出了关于寡核苷酸治疗领域如何改进以帮助未来分析的想法。和链弹出模型进行了分析。治疗性寡核苷酸必须经过主要监管机构的批准，杂质和降解产物必须经过充分表征才能获得批准。报告了目前可接受的寡核苷酸杂质阈值。讨论了来自这些类型分子的杂质和降解产物的方面，以及确定寡核苷酸相关物质的最佳分析策略。最后，提出了关于寡核苷酸治疗领域如何改进以帮助未来分析的想法。讨论了来自这些类型分子的杂质和降解产物的方面，以及确定寡核苷酸相关物质的最佳分析策略。最后，提出了关于寡核苷酸治疗领域如何改进以帮助未来分析的想法。讨论了来自这些类型分子的杂质和降解产物的方面，以及确定寡核苷酸相关物质的最佳分析策略。最后，提出了关于寡核苷酸治疗领域如何改进以帮助未来分析的想法。