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Evaluation of different IRES-mediated tricistronic plasmid designs for expression of an anti-PCSK9 biosimilar monoclonal antibody in CHO cells
Biotechnology Letters ( IF 2.7 ) Pub Date : 2020-07-16 , DOI: 10.1007/s10529-020-02952-8 Thayana A Cruz 1, 2, 3 , Marcos B Pinho 1, 4 , Leda R Castilho 1, 2
Biotechnology Letters ( IF 2.7 ) Pub Date : 2020-07-16 , DOI: 10.1007/s10529-020-02952-8 Thayana A Cruz 1, 2, 3 , Marcos B Pinho 1, 4 , Leda R Castilho 1, 2
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To compare different approaches for the expression of an anti-PCSK9 biosimilar monoclonal antibody (mAb) in CHO cells using IRES-mediated tricistronic plasmid vectors combining different signal peptides, IRES elements and selection markers. Transient transfection indicated a similar level of secreted mAb 48 h post-transfection for all constructs. However, transfections carried out with circular plasmids showed a higher expression than with linearized plasmids. After two months under selection pressure, only part of the transfected pools recovered. The cultures co-transfected using two antibiotics as selection markers for double selection did not recover. Growth, metabolism and mAb production profiles of the only part of the transfected pools recovered resulting stable pools were compared and the stable pool transfected with circular L1-LC-IRES-H7-HC-IRES-NEO plasmid was chosen for further studies, due to higher cell growth and mAb production. Critical quality attributes of the protein A-purified mAb such as purity, homogeneity, binding affinity to PCSK9, and amino acid sequence were assessed confirming the success of the approach adopted in this study. The expression platform proposed showed to be efficient to produce a high-quality anti-PCSK9 mAb in stable CHO cell pools and provides benchmarks for fast production of different mAbs for characterization, formulation studies and pre-clinical investigation.
中文翻译:
评估不同 IRES 介导的三顺反子质粒设计在 CHO 细胞中表达抗 PCSK9 生物仿制药单克隆抗体
比较使用结合不同信号肽、IRES 元件和选择标记的 IRES 介导的三顺反子质粒载体在 CHO 细胞中表达抗 PCSK9 生物仿制药单克隆抗体 (mAb) 的不同方法。瞬时转染表明所有构建体在转染后 48 小时的分泌 mAb 水平相似。然而,使用环状质粒进行的转染显示出比使用线性化质粒更高的表达。在选择压力下两个月后,只有部分转染池恢复。使用两种抗生素作为双重选择的选择标记共转染的培养物没有恢复。生长,比较回收的仅部分转染池的代谢和 mAb 生产概况,结果稳定池,并选择用环状 L1-LC-IRES-H7-HC-IRES-NEO 质粒转染的稳定池进行进一步研究,因为更高的细胞生长和 mAb 生产。评估了蛋白 A 纯化 mAb 的关键质量属性,例如纯度、均一性、与 PCSK9 的结合亲和力和氨基酸序列,证实了本研究中采用的方法的成功。提出的表达平台显示出在稳定的 CHO 细胞库中生产高质量抗 PCSK9 mAb 的效率,并为快速生产不同的 mAb 提供了基准,用于表征、配方研究和临床前研究。评估了蛋白 A 纯化 mAb 的关键质量属性,例如纯度、均一性、与 PCSK9 的结合亲和力和氨基酸序列,证实了本研究中采用的方法的成功。所提出的表达平台显示可有效地在稳定的 CHO 细胞库中生产高质量的抗 PCSK9 mAb,并为快速生产不同的 mAb 以进行表征、配方研究和临床前研究提供基准。评估了蛋白 A 纯化 mAb 的关键质量属性,例如纯度、均一性、与 PCSK9 的结合亲和力和氨基酸序列,证实了本研究中采用的方法的成功。提出的表达平台显示出在稳定的 CHO 细胞库中生产高质量抗 PCSK9 mAb 的效率,并为快速生产不同的 mAb 提供了基准,用于表征、配方研究和临床前研究。
更新日期:2020-07-16
中文翻译:
评估不同 IRES 介导的三顺反子质粒设计在 CHO 细胞中表达抗 PCSK9 生物仿制药单克隆抗体
比较使用结合不同信号肽、IRES 元件和选择标记的 IRES 介导的三顺反子质粒载体在 CHO 细胞中表达抗 PCSK9 生物仿制药单克隆抗体 (mAb) 的不同方法。瞬时转染表明所有构建体在转染后 48 小时的分泌 mAb 水平相似。然而,使用环状质粒进行的转染显示出比使用线性化质粒更高的表达。在选择压力下两个月后,只有部分转染池恢复。使用两种抗生素作为双重选择的选择标记共转染的培养物没有恢复。生长,比较回收的仅部分转染池的代谢和 mAb 生产概况,结果稳定池,并选择用环状 L1-LC-IRES-H7-HC-IRES-NEO 质粒转染的稳定池进行进一步研究,因为更高的细胞生长和 mAb 生产。评估了蛋白 A 纯化 mAb 的关键质量属性,例如纯度、均一性、与 PCSK9 的结合亲和力和氨基酸序列,证实了本研究中采用的方法的成功。提出的表达平台显示出在稳定的 CHO 细胞库中生产高质量抗 PCSK9 mAb 的效率,并为快速生产不同的 mAb 提供了基准,用于表征、配方研究和临床前研究。评估了蛋白 A 纯化 mAb 的关键质量属性,例如纯度、均一性、与 PCSK9 的结合亲和力和氨基酸序列,证实了本研究中采用的方法的成功。所提出的表达平台显示可有效地在稳定的 CHO 细胞库中生产高质量的抗 PCSK9 mAb,并为快速生产不同的 mAb 以进行表征、配方研究和临床前研究提供基准。评估了蛋白 A 纯化 mAb 的关键质量属性,例如纯度、均一性、与 PCSK9 的结合亲和力和氨基酸序列,证实了本研究中采用的方法的成功。提出的表达平台显示出在稳定的 CHO 细胞库中生产高质量抗 PCSK9 mAb 的效率,并为快速生产不同的 mAb 提供了基准,用于表征、配方研究和临床前研究。