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Large‐scale production, purification, and function of a tumor multi‐epitope vaccine: Peptibody with bFGF/VEGFA
Engineering in Life Sciences ( IF 2.7 ) Pub Date : 2020-07-29 , DOI: 10.1002/elsc.202000020 Ligang Zhang 1 , Chengcheng Jiang 1 , Xi Chen 1 , Jiangtao Gu 1 , Qifang Song 1 , Hui Zhong 2 , Sheng Xiong 3 , Qingfeng Dong 4 , Jin-Chen Yu 4 , Ning Deng 1
Engineering in Life Sciences ( IF 2.7 ) Pub Date : 2020-07-29 , DOI: 10.1002/elsc.202000020 Ligang Zhang 1 , Chengcheng Jiang 1 , Xi Chen 1 , Jiangtao Gu 1 , Qifang Song 1 , Hui Zhong 2 , Sheng Xiong 3 , Qingfeng Dong 4 , Jin-Chen Yu 4 , Ning Deng 1
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In tumor tissue, basic fibroblast growth factor (bFGF) and vascular endothelial growth factor A (VEGFA) promote tumorigenesis by activating angiogenesis, but targeting single factor may produce drug resistance and compensatory angiogenesis. The Peptibody with bFGF/VEGFA was designed to simultaneously blockade these two factors. We were aiming to produce this Fc fusion protein in a large scale. The biological characterizations of Peptibody strains were identified as Escherichia coli and the fermentation mode was optimized in the shake flasks and 10‐L bioreactor. The fermentation was scaled up to 100 L, with wet cell weight (WCW) 126 g/L, production 1.41 g/L, and productivity 0.35 g/(L·h) of IPTG induction. The target protein was isolated by cation‐exchange, hydrophobic and Protein A chromatography, with total recovery of 60.28% and HPLC purity of 86.71%. The host cells protein, DNA, and endotoxin residues were within the threshold. In mouse model, immunization of Peptibody vaccine could significantly suppressed the tumor growth and angiogenesis, with inhibition rate of 57.73 and 39.34%. The Peptibody vaccine could elicit high‐titer anti‐bFGF and anti‐VEGFA antibodies, which inhibited the proliferation and migration of Lewis lung cancer cell cells by decreasing the Akt/MAPK signal pathways. Therefore, the Peptibody with bFGF/VEGFA might be used as a therapeutic tumor vaccine. The large‐scale process we developed could support its industrial production and pre‐clinical study in the future.
中文翻译:
肿瘤多表位疫苗的大规模生产、纯化和功能:具有 bFGF/VEGFA 的肽体
在肿瘤组织中,碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和血管内皮生长因子A(VEGFA)通过激活血管生成促进肿瘤发生,但靶向单一因子可能产生耐药性和代偿性血管生成。具有 bFGF/VEGFA 的肽体旨在同时阻断这两个因子。我们的目标是大规模生产这种 Fc 融合蛋白。Peptibody 菌株的生物学特性鉴定为大肠杆菌,并在摇瓶和 10 L 生物反应器中优化了发酵模式。发酵规模扩大到 100 L,湿细胞重量 (WCW) 为 126 g/L,产量为 1.41 g/L,IPTG 诱导的生产率为 0.35 g/(L·h)。通过阳离子交换、疏水和蛋白 A 色谱分离目标蛋白,总回收率为 60。28% 和 86.71% 的 HPLC 纯度。宿主细胞蛋白、DNA 和内毒素残留均在阈值范围内。在小鼠模型中,肽体疫苗免疫可显着抑制肿瘤生长和血管生成,抑制率分别为57.73%和39.34%。Peptibody 疫苗可诱导高滴度抗 bFGF 和抗 VEGFA 抗体,通过减少 Akt/MAPK 信号通路抑制 Lewis 肺癌细胞的增殖和迁移。因此,具有 bFGF/VEGFA 的肽体可用作治疗性肿瘤疫苗。我们开发的大规模工艺可以支持其未来的工业生产和临床前研究。肽体疫苗免疫可显着抑制肿瘤生长和血管生成,抑制率分别为57.73%和39.34%。Peptibody 疫苗可诱导高滴度抗 bFGF 和抗 VEGFA 抗体,通过减少 Akt/MAPK 信号通路抑制 Lewis 肺癌细胞的增殖和迁移。因此,具有 bFGF/VEGFA 的肽体可用作治疗性肿瘤疫苗。我们开发的大规模工艺可以支持其未来的工业生产和临床前研究。肽体疫苗免疫可显着抑制肿瘤生长和血管生成,抑制率分别为57.73%和39.34%。Peptibody 疫苗可诱导高滴度抗 bFGF 和抗 VEGFA 抗体,通过减少 Akt/MAPK 信号通路抑制 Lewis 肺癌细胞的增殖和迁移。因此,具有 bFGF/VEGFA 的肽体可用作治疗性肿瘤疫苗。我们开发的大规模工艺可以支持其未来的工业生产和临床前研究。具有 bFGF/VEGFA 的肽体可用作治疗性肿瘤疫苗。我们开发的大规模工艺可以支持其未来的工业生产和临床前研究。具有 bFGF/VEGFA 的肽体可用作治疗性肿瘤疫苗。我们开发的大规模工艺可以支持其未来的工业生产和临床前研究。
更新日期:2020-07-29
中文翻译:
肿瘤多表位疫苗的大规模生产、纯化和功能:具有 bFGF/VEGFA 的肽体
在肿瘤组织中,碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和血管内皮生长因子A(VEGFA)通过激活血管生成促进肿瘤发生,但靶向单一因子可能产生耐药性和代偿性血管生成。具有 bFGF/VEGFA 的肽体旨在同时阻断这两个因子。我们的目标是大规模生产这种 Fc 融合蛋白。Peptibody 菌株的生物学特性鉴定为大肠杆菌,并在摇瓶和 10 L 生物反应器中优化了发酵模式。发酵规模扩大到 100 L,湿细胞重量 (WCW) 为 126 g/L,产量为 1.41 g/L,IPTG 诱导的生产率为 0.35 g/(L·h)。通过阳离子交换、疏水和蛋白 A 色谱分离目标蛋白,总回收率为 60。28% 和 86.71% 的 HPLC 纯度。宿主细胞蛋白、DNA 和内毒素残留均在阈值范围内。在小鼠模型中,肽体疫苗免疫可显着抑制肿瘤生长和血管生成,抑制率分别为57.73%和39.34%。Peptibody 疫苗可诱导高滴度抗 bFGF 和抗 VEGFA 抗体,通过减少 Akt/MAPK 信号通路抑制 Lewis 肺癌细胞的增殖和迁移。因此,具有 bFGF/VEGFA 的肽体可用作治疗性肿瘤疫苗。我们开发的大规模工艺可以支持其未来的工业生产和临床前研究。肽体疫苗免疫可显着抑制肿瘤生长和血管生成,抑制率分别为57.73%和39.34%。Peptibody 疫苗可诱导高滴度抗 bFGF 和抗 VEGFA 抗体,通过减少 Akt/MAPK 信号通路抑制 Lewis 肺癌细胞的增殖和迁移。因此,具有 bFGF/VEGFA 的肽体可用作治疗性肿瘤疫苗。我们开发的大规模工艺可以支持其未来的工业生产和临床前研究。肽体疫苗免疫可显着抑制肿瘤生长和血管生成,抑制率分别为57.73%和39.34%。Peptibody 疫苗可诱导高滴度抗 bFGF 和抗 VEGFA 抗体,通过减少 Akt/MAPK 信号通路抑制 Lewis 肺癌细胞的增殖和迁移。因此,具有 bFGF/VEGFA 的肽体可用作治疗性肿瘤疫苗。我们开发的大规模工艺可以支持其未来的工业生产和临床前研究。具有 bFGF/VEGFA 的肽体可用作治疗性肿瘤疫苗。我们开发的大规模工艺可以支持其未来的工业生产和临床前研究。具有 bFGF/VEGFA 的肽体可用作治疗性肿瘤疫苗。我们开发的大规模工艺可以支持其未来的工业生产和临床前研究。