The Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus (SARS-CoV) emergence in 2003 introduced the first serious human coronavirus pathogen to an unprepared world. To control emerging viruses, existing successful anti(retro)viral therapies can inspire antiviral strategies, as conserved viral enzymes (eg., viral proteases and RNA-dependent RNA polymerases) represent targets of choice. Since 2003, much effort has been expended in the characterization of the SARS-CoV replication/transcription machinery. Until recently, a pure and highly active preparation of SARS-CoV recombinant RNA synthesis machinery was not available, impeding target-based high throughput screening of drug candidates against this viral family. The current Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus-2 (SARS-CoV-2) pandemic revealed a new pathogen whose RNA synthesis machinery is highly (>96% aa identity) homologous to SARS-CoV. This phylogenetic relatedness highlights the potential use of conserved replication enzymes to discover inhibitors against this significant pathogen, which in turn, contributes to scientific preparedness against emerging viruses. Here, we report the use of a purified and highly active SARS-CoV replication/transcription complex (RTC) to set-up a high-throughput screening of Coronavirus RNA synthesis inhibitors. The screening of a small (1,520 compounds) chemical library of FDA-approved drugs demonstrates the robustness of our assay and will allow to speed-up drug repositioning or novel drug discovery against the SARS-CoV-2.

中文翻译：

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SARS-CoV RNA合成复合物的基于荧光的高通量筛选测定

2003年出现的严重急性呼吸系统综合症冠状病毒（SARS-CoV）将一个首个严重的人类冠状病毒病原体引入了一个毫无准备的世界。为了控制新兴病毒，现有的成功的抗（逆）病毒疗法可以激发抗病毒策略，因为保守的病毒酶（例如病毒蛋白酶和RNA依赖性RNA聚合酶）代表了选择的目标。自2003年以来，在表征SARS-CoV复制/转录机制方面已付出了很多努力。直到最近，SARS-CoV重组RNA合成机器的纯净和高活性的制备方法还不可用，这阻碍了针对该病毒家族的候选药物的基于靶标的高通量筛选。当前的严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2（SARS-CoV-2）大流行揭示了一种新病原体，其RNA合成机制与SARS-CoV具有高度同源性（> 96％氨基酸同一性）。这种系统发育的相关性突出了保守复制酶潜在用途，以发现针对这种重要病原体的抑制剂，从而有助于科学防范新出现的病毒。在这里，我们报道了使用纯化的高活性SARS-CoV复制/转录复合物（RTC）来建立冠状病毒RNA合成抑制剂的高通量筛选。FDA批准的药物的一个小的（1520个化合物）化学文库的筛选显示了我们测定的可靠性，并且可以加快针对SARS-CoV-2的药物重新定位或发现新药的速度。与SARS-CoV同源（96％aa身份）。这种系统发育的相关性突出了保守复制酶潜在用途，以发现针对这种重要病原体的抑制剂，从而有助于科学防范新出现的病毒。在这里，我们报道了使用纯化的高活性SARS-CoV复制/转录复合物（RTC）来建立冠状病毒RNA合成抑制剂的高通量筛选。FDA批准的药物的一个小的（1520个化合物）化学文库的筛选显示了我们测定的可靠性，并且可以加快针对SARS-CoV-2的药物重新定位或发现新药的速度。与SARS-CoV同源（96％aa身份）。这种系统发育的相关性突出了保守复制酶潜在用途，以发现针对这种重要病原体的抑制剂，从而有助于科学防范新出现的病毒。在这里，我们报道了使用纯化的高活性SARS-CoV复制/转录复合物（RTC）来建立冠状病毒RNA合成抑制剂的高通量筛选。FDA批准的药物的一个小的（1520个化合物）化学文库的筛选显示了我们测定的可靠性，并且可以加快针对SARS-CoV-2的药物重新定位或发现新药的速度。有助于针对新兴病毒的科学准备。在这里，我们报道了使用纯化的高活性SARS-CoV复制/转录复合物（RTC）来建立冠状病毒RNA合成抑制剂的高通量筛选。FDA批准的药物的一个小的（1520个化合物）化学文库的筛选显示了我们测定的可靠性，并且可以加快针对SARS-CoV-2的药物重新定位或发现新药的速度。有助于针对新兴病毒的科学准备。在这里，我们报道了使用纯化的高活性SARS-CoV复制/转录复合物（RTC）来建立冠状病毒RNA合成抑制剂的高通量筛选。FDA批准的药物的一个小的（1520个化合物）化学文库的筛选显示了我们测定的可靠性，并且可以加快针对SARS-CoV-2的药物重新定位或发现新药的速度。