The aim of this study was to determine the polarization of macrophages in the tumor microenvironment, as well as the effect of soluble factors secreted from these polarized macrophages on etoposide‐induced cancer cell apoptosis. We investigated the effect of soluble factors secreted from the supernatant of PC3 cells treated with TLR4 and TLR8 agonists, and etoposide on macrophage polarization at the protein level through flow cytometry and enzyme‐linked immunosorbent assay. We further explored the cell cycle distribution and phagocytic activity of THP‐1 cells by flow cytometry. To imitate the relationship between cancer cells and tumor‐associated macrophages (TAMs), we cocultured macrophages with etoposide‐treated PC3 cells. After the incubation, the apoptosis in cancer cells was assessed through FACS analysis and by annexin V and PI staining. Our results demonstrate that protein expression of M1 and M2 markers confirmed the upregulation of M1 markers upon etoposide treatment, and mixed M1/M2 phenotype upon treatment with TLR agonists‐treated PC3 supernatant. In coculture methods, our results demonstrate that the apoptosis of etoposide‐treated cancer cells increases in the presence of M0 macrophages and THP‐1 cells incubated with the supernatant of TLR4 agonists‐treated PC3 cells. These results indicate clear protective effects of M0 macrophages and THP‐1 cells incubated with the supernatant of PC3 cells treated with TLR4 agonists (THP‐1 + SUP + TLR4a) on etoposide‐induced cancer cell apoptosis.

中文翻译：

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前列腺癌细胞响应依托泊苷和 TLR 激动剂治疗调节 THP-1 细胞的分化。

本研究的目的是确定肿瘤微环境中巨噬细胞的极化，以及这些极化巨噬细胞分泌的可溶性因子对依托泊苷诱导的癌细胞凋亡的影响。我们通过流式细胞术和酶联免疫吸附试验研究了用 TLR4 和 TLR8 激动剂和依托泊苷处理的 PC3 细胞上清液分泌的可溶性因子对巨噬细胞极化的影响。我们通过流式细胞术进一步探索了 THP-1 细胞的细胞周期分布和吞噬活性。为了模拟癌细胞与肿瘤相关巨噬细胞 (TAM) 之间的关系，我们将巨噬细胞与依托泊苷处理的 PC3 细胞共培养。孵育后，通过 FACS 分析和膜联蛋白 V 和 PI 染色评估癌细胞的凋亡。我们的结果表明，M1 和 M2 标志物的蛋白质表达证实了依托泊苷处理后 M1 标志物的上调，以及用 TLR 激动剂处理的 PC3 上清液处理后的混合 M1/M2 表型。在共培养方法中，我们的结果表明，在与 TLR4 激动剂处理的 PC3 细胞上清液一起孵育的 M0 巨噬细胞和 THP-1 细胞存在的情况下，依托泊苷处理的癌细胞的凋亡增加。这些结果表明 M0 巨噬细胞和 THP-1 细胞与用 TLR4 激动剂 (THP-1 + SUP + TLR4a) 处理的 PC3 细胞的上清液一起孵育对依托泊苷诱导的癌细胞凋亡具有明显的保护作用。用 TLR 激动剂处理的 PC3 上清液处理后的混合 M1/M2 表型。在共培养方法中，我们的结果表明，在与 TLR4 激动剂处理的 PC3 细胞上清液一起孵育的 M0 巨噬细胞和 THP-1 细胞存在的情况下，依托泊苷处理的癌细胞的凋亡增加。这些结果表明 M0 巨噬细胞和 THP-1 细胞与用 TLR4 激动剂 (THP-1 + SUP + TLR4a) 处理的 PC3 细胞的上清液一起孵育对依托泊苷诱导的癌细胞凋亡具有明显的保护作用。用 TLR 激动剂处理的 PC3 上清液处理后的混合 M1/M2 表型。在共培养方法中，我们的结果表明，在与 TLR4 激动剂处理的 PC3 细胞上清液一起孵育的 M0 巨噬细胞和 THP-1 细胞存在的情况下，依托泊苷处理的癌细胞的凋亡增加。这些结果表明 M0 巨噬细胞和 THP-1 细胞与用 TLR4 激动剂 (THP-1 + SUP + TLR4a) 处理的 PC3 细胞的上清液一起孵育对依托泊苷诱导的癌细胞凋亡具有明显的保护作用。