Tuberculosis remains a global challenge, particularly with a growing number of resistant cases, which may become an obstacle to eliminating this disease. Standardized short-course therapy composed of first-line anti-tuberculosis drugs isoniazid (INH), rifampicin (RIF), ethambutol (EMB), and pyrazinamide (PZA) is playing vital roles for curbing the rapid spread of tuberculosis. However, some patients have poor responses to standardized short-course therapy. As the number of drug-resistant tuberculosis increase, some other anti-tuberculous drugs are needed to achieve better treatment outcomes. In this study, we established a UPLC-MS/MS method for simultaneous detection of ten anti-tuberculosis drugs in human plasma including INH, EMB, PZA, RIF, rifampin, rifapentine as well as four second-line antituberculosis drugs, i.e. ethionamide, protionamide, thiosemicarbazone and clofazimine. This study contains almost all the commonly used anti-tuberculosis drugs. The plasma samples were treated with acetonitrile to precipitate proteins, and doped with the isotope internal standard. A Shiseido CAPCELL RAK-ADME (2.1 mm × 50 mm, 3 μm) column was used for chromatographic separation, and acetonitrile-water (containing 0.1% formic acid) was the mobile phase. The separation used gradient elution with a flow rate of 0.4 mL/min. The column temperature was 40 °C, and the sample volume was 1 μL. The electrospray ionization source (ESI) and the positive ion multiple reaction monitoring (MRM) mode were used for the detection. The analysis time was as short as 7 min. The results show a good linear relationship under optimized conditions in the range of 5.00–7.50 × 10³, 1.00–1.50 × 10³, 5.00–5.00 × 10⁴, 5.00–7.50 × 10³, 1.00–3.00 × 10³, 1.00 × 10¹–1.00 × 10⁴, 1.00–3.00 × 10³, 1.00–3.00 × 10³, 2.00–4.00 × 10³, and 1.00 × 10^-1-2.00 × 10² ng/mL for INH, EMB PZA, RIF, rifabutin, rifapentine, ethionamide, protionamide, thiosemicarbazone, and clofazimine, respectively, with a linear correlation coefficient of R > 0.99. Finally, 34 patients with pulmonary TB were tested for therapeutic drug monitoring. The results showed that the presented method have significant advances in sensitivity, separation efficiency and simplicity.

结核病仍然是一项全球挑战，特别是在耐药病例数量不断增加的情况下，这可能成为消除这种疾病的障碍。由一线抗结核药物异烟肼（INH），利福平（RIF），乙胺丁醇（EMB）和吡嗪酰胺（PZA）组成的标准化短程治疗在遏制结核病的迅速蔓延中起着至关重要的作用。但是，一些患者对标准的短程治疗反应较差。随着耐药性结核病数量的增加，还需要其他一些抗结核药才能达到更好的治疗效果。在这项研究中，我们建立了一种UPLC-MS / MS方法，用于同时检测人血浆中的十种抗结核药物，包括INH，EMB，PZA，RIF，利福平，利福喷丁以及四种二线抗结核药物，即乙硫酰胺，丙酰胺 硫半脲和氯氟嗪明。这项研究包含几乎所有常用的抗结核药物。血浆样品用乙腈处理以沉淀蛋白质，并掺入同位素内标。使用Shiseido CAPCELL RAK-ADME（2.1 mm×50 mm，3μm）色谱柱进行色谱分离，以乙腈-水（含0.1％的甲酸）为流动相。分离使用梯度洗脱，流速为0.4 mL / min。柱温为40°C，样品体积为1μL。检测采用电喷雾电离源（ESI）和阳离子多反应监测（MRM）模式。分析时间短至7分钟。结果表明，在最佳条件下（5.00–7.50×10），线性关系良好。这项研究包含几乎所有常用的抗结核药物。血浆样品用乙腈处理以沉淀蛋白质，并掺入同位素内标。使用Shiseido CAPCELL RAK-ADME（2.1 mm×50 mm，3μm）色谱柱进行色谱分离，以乙腈-水（含0.1％的甲酸）为流动相。分离使用梯度洗脱，流速为0.4 mL / min。柱温为40°C，样品体积为1μL。检测采用电喷雾电离源（ESI）和阳离子多反应监测（MRM）模式。分析时间短至7分钟。结果表明，在最佳条件下（5.00–7.50×10），线性关系良好。这项研究包含几乎所有常用的抗结核药物。血浆样品用乙腈处理以沉淀蛋白质，并掺入同位素内标。使用Shiseido CAPCELL RAK-ADME（2.1 mm×50 mm，3μm）色谱柱进行色谱分离，以乙腈-水（含0.1％的甲酸）为流动相。分离使用梯度洗脱，流速为0.4 mL / min。柱温为40°C，样品体积为1μL。检测采用电喷雾电离源（ESI）和阳离子多反应监测（MRM）模式。分析时间短至7分钟。结果表明，在最佳条件下（5.00–7.50×10），线性关系良好。血浆样品用乙腈处理以沉淀蛋白质，并掺入同位素内标。使用Shiseido CAPCELL RAK-ADME（2.1 mm×50 mm，3μm）色谱柱进行色谱分离，以乙腈-水（含0.1％的甲酸）为流动相。分离使用梯度洗脱，流速为0.4 mL / min。柱温为40°C，样品体积为1μL。检测采用电喷雾电离源（ESI）和阳离子多反应监测（MRM）模式。分析时间短至7分钟。结果表明，在最佳条件下（5.00–7.50×10），线性关系良好。血浆样品用乙腈处理以沉淀蛋白质，并掺入同位素内标。使用Shiseido CAPCELL RAK-ADME（2.1 mm×50 mm，3μm）色谱柱进行色谱分离，以乙腈-水（含0.1％的甲酸）为流动相。分离使用梯度洗脱，流速为0.4 mL / min。柱温为40°C，样品体积为1μL。检测采用电喷雾电离源（ESI）和阳离子多反应监测（MRM）模式。分析时间短至7分钟。结果表明，在最佳条件下（5.00–7.50×10），线性关系良好。3毫米色谱柱用于色谱分离，乙腈-水（含0.1％甲酸）为流动相。分离使用梯度洗脱，流速为0.4 mL / min。柱温为40°C，样品体积为1μL。检测采用电喷雾电离源（ESI）和阳离子多反应监测（MRM）模式。分析时间短至7分钟。结果表明，在最佳条件下（5.00–7.50×10），线性关系良好。使用3 µm色谱柱进行色谱分离，以乙腈-水（含0.1％的甲酸）为流动相。分离使用梯度洗脱，流速为0.4 mL / min。柱温为40°C，样品体积为1μL。检测采用电喷雾电离源（ESI）和阳离子多反应监测（MRM）模式。分析时间短至7分钟。结果表明，在最佳条件下（5.00–7.50×10），线性关系良好。检测采用电喷雾电离源（ESI）和阳离子多反应监测（MRM）模式。分析时间短至7分钟。结果表明，在最佳条件下（5.00–7.50×10），线性关系良好。检测采用电喷雾电离源（ESI）和阳离子多反应监测（MRM）模式。分析时间短至7分钟。结果表明，在最佳条件下（5.00–7.50×10），线性关系良好。³，1.00-1.50×10 ³，5.00-5.00×10 ⁴，5.00-7.50×10 ³，1.00-3.00×10 ³，1.00×10 ¹ -1.00×10 ⁴，1.00-3.00×10 ³，1.00-3.00 ×10 ³，2.00-4.00×10 ³，和1.00×10 ^-1 -2.00×10 ²ng / mL分别用于INH，EMB PZA，RIF，利福布汀，利福喷丁，乙硫磷酰胺，丙氨酰胺，硫代氨基脲和氯法齐明，线性相关系数R> 0.99。最后，对34例肺结核患者进行了治疗药物监测。结果表明，所提出的方法在灵敏度，分离效率和简便性方面都有重要进展。