Higenamine is a natural benzyltetrahydroisoquinoline alkaloid produced by various plants. In the World Anti-Doping Agency report of 2020, higenamine is classified as a class S3 (selective and nonselective β2-agonist) prohibited substance. To minimize the problems resulting from the misuse of higenamine-containing products as well as from the abuse of doping agents in sport, numerous higenamine-detection methods have been investigated. In the present study, a monoclonal antibody against the (S)-enantiomer of higenamine was successfully produced and applied in the indirect competitive ELISA to detect the content of (S)-higenamine in plant samples and related products. By immunizing BALB/c mice with higenamine-BSA, the aforementioned monoclonal antibody was produced even when the hapten number, which was the higenamine molecules conjugated to the BSA molecule, was relatively low (approximately 4). The MAb was characterized and utilized in the established icELISA assay with a detectable range of 7.81 - 125 ng/mL. The assay limit of detection (LOD) was 4.41 ng/mL, indicating higher sensitivity than the conventional HPLC-UV methods. Various validation processes demonstrated that icELISA was precise, with the maximum CV (%) of the intra- and inter-assays of 11.58% and 10.18%, respectively. Moreover, the assay was accurate, with the recovery rates of spiked (S)-higenamine ranging from 82% to 113%, and sufficiently reliable for the detection of (S)-higenamine in various kinds of samples. Notably, the present study describes the first immunoassay for (S)-higenamine.

中文翻译：

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ELISA 检测禁用的掺杂剂 Higenamine

Higenamine 是一种由多种植物产生的天然苄基四氢异喹啉生物碱。在世界反兴奋剂机构 2020 年的报告中，higenamine 被列为 S3 类（选择性和非选择性 β2-激动剂）禁用物质。为了最大限度地减少因滥用含higenamine 的产品以及在体育运动中滥用兴奋剂引起的问题，已经研究了许多higenamine 检测方法。本研究成功制备了一种针对higenamine（S）-对映体的单克隆抗体，并应用于间接竞争ELISA检测植物样品及相关产品中（S）-higenamine的含量。通过用higenamine-BSA免疫BALB/c小鼠，即使当半抗原数为 与 BSA 分子结合的 Higenamine 分子相对较低（约 4）。MAb 被表征并用于已建立的 icELISA 检测，可检测范围为 7.81 - 125 ng/mL。检测限 (LOD) 为 4.41 ng/mL，表明其灵敏度高于传统的 HPLC-UV 方法。各种验证过程表明 icELISA 是精确的，测定内和测定间的最大 CV (%) 分别为 11.58% 和 10.18%。此外，该测定准确，加标(S)-higenamine的回收率为82%至113%，对于检测各种样品中的(S)-higenamine具有足够的可靠性。值得注意的是，本研究描述了 (S)-higenamine 的首次免疫测定。MAb 被表征并用于已建立的 icELISA 检测，可检测范围为 7.81 - 125 ng/mL。检测限 (LOD) 为 4.41 ng/mL，表明其灵敏度高于传统的 HPLC-UV 方法。各种验证过程表明 icELISA 是精确的，测定内和测定间的最大 CV (%) 分别为 11.58% 和 10.18%。此外，该测定准确，加标(S)-higenamine的回收率为82%至113%，对于检测各种样品中的(S)-higenamine具有足够的可靠性。值得注意的是，本研究描述了 (S)-higenamine 的首次免疫测定。MAb 被表征并用于已建立的 icELISA 检测，可检测范围为 7.81 - 125 ng/mL。检测限 (LOD) 为 4.41 ng/mL，表明其灵敏度高于传统的 HPLC-UV 方法。各种验证过程表明 icELISA 是精确的，测定内和测定间的最大 CV (%) 分别为 11.58% 和 10.18%。此外，该测定准确，加标(S)-higenamine的回收率为82%至113%，对于检测各种样品中的(S)-higenamine具有足够的可靠性。值得注意的是，本研究描述了 (S)-higenamine 的首次免疫测定。表明比传统的 HPLC-UV 方法具有更高的灵敏度。各种验证过程表明 icELISA 是精确的，测定内和测定间的最大 CV (%) 分别为 11.58% 和 10.18%。此外，该测定准确，加标(S)-higenamine的回收率为82%至113%，对于检测各种样品中的(S)-higenamine具有足够的可靠性。值得注意的是，本研究描述了 (S)-higenamine 的首次免疫测定。表明比传统的 HPLC-UV 方法具有更高的灵敏度。各种验证过程表明 icELISA 是精确的，测定内和测定间的最大 CV (%) 分别为 11.58% 和 10.18%。此外，该测定准确，加标(S)-higenamine的回收率为82%至113%，对于检测各种样品中的(S)-higenamine具有足够的可靠性。值得注意的是，本研究描述了 (S)-higenamine 的首次免疫测定。并且足够可靠地检测各种样品中的 (S)-higenamine。值得注意的是，本研究描述了 (S)-higenamine 的首次免疫测定。并且足够可靠地检测各种样品中的 (S)-higenamine。值得注意的是，本研究描述了 (S)-higenamine 的首次免疫测定。