Reassortment is an important mechanism in the evolution of group A rotaviruses (RVAs), yielding viruses with novel genetic and phenotypic traits. The classical methods for generating RVA reassortants with the desired genetic combinations are laborious and time-consuming because of the screening and selection processes required to isolate a desired reassortant. Taking advantage of a recently developed RVA reverse genetics system based on just 11 cloned cDNAs encoding the RVA genome (11 plasmid-only system), we prepared a panel of simian SA11-L2 virus-based single-gene reassortants, each containing 1 segment derived from human KU virus of the G1P[8] genotype. It was shown that there was no gene-specific restriction of the reassortment potential. In addition to these 11 single-gene reassortants, a triple-gene reassortant with KU-derived core-encoding VP1–3 gene segments with the SA11-L2 genetic background, which make up a virion composed of the KU-based core, and SA11-L2-based intermediate and outer layers, could also be prepared with the 11 plasmid-only system. Finally, for possible clinical application of this system, we generated a series of VP7 reassortants representing all the major human RVA G genotypes (G1–4, G9 and G12) efficiently. The preparation of each of these single-gene reassortants was achieved within just 2 weeks. Our results demonstrate that the 11 plasmid-only system allows the rapid and reliable generation of RVA single-gene reassortants, which will be useful for basic research and clinical applications.

中文翻译：

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通过基于十一个仅基于质粒的反向遗传学快速生成轮状病毒单基因重配子。

重新分类是A组轮状病毒（RVA）进化的重要机制，可产生具有新的遗传和表型特征的病毒。产生具有所需遗传组合的RVA重配子的经典方法费力且费时，因为分离所需重配子所需的筛选和选择过程。利用仅基于11个克隆的编码RVA基因组的cDNA的RVA逆向遗传系统（仅11个质粒系统），我们制备了一组基于猿猴SA11-L2病毒的单基因重配体，每个重配体包含1个衍生的片段来自人类G1P [8]基因型KU病毒。结果表明，重组基因没有基因特异性的限制。除了这11个单基因重组子之外，一个具有SA11-L2遗传背景的，由KU衍生的核心编码VP1-3基因片段组成的三基因重配体，可以构成由KU基核心以及SA11-L2基中间层和外层组成的病毒体也可使用仅11个质粒的系统制备。最后，为该系统的可能临床应用，我们有效地产生了代表所有主要人类RVA G基因型（G1-4，G9和G12）的一系列VP7重配体。这些单基因重组子的制备仅在2周内完成。我们的结果表明，仅11个质粒的系统可以快速可靠地生成RVA单基因重配子，这对基础研究和临床应用将非常有用。以及基于SA11-L2的中间层和外层，也可以使用仅11个质粒的系统制备。最后，为该系统的可能临床应用，我们有效地产生了代表所有主要人类RVA G基因型（G1-4，G9和G12）的一系列VP7重配体。这些单基因重组子的制备仅在2周内完成。我们的结果表明，仅11个质粒的系统可以快速可靠地生成RVA单基因重配子，这对基础研究和临床应用将非常有用。以及基于SA11-L2的中间层和外层，也可以使用仅11个质粒的系统制备。最后，为该系统的可能临床应用，我们有效地产生了代表所有主要人类RVA G基因型（G1-4，G9和G12）的一系列VP7重配体。这些单基因重组子的制备仅在2周内完成。我们的结果表明，仅11个质粒的系统可以快速可靠地生成RVA单基因重配子，这对基础研究和临床应用将非常有用。这些单基因重组子的制备仅在2周内完成。我们的结果表明，仅11个质粒的系统可以快速可靠地生成RVA单基因重配子，这对基础研究和临床应用将非常有用。这些单基因重组子的制备仅在2周内完成。我们的结果表明，仅11个质粒的系统可以快速可靠地生成RVA单基因重配子，这对基础研究和临床应用将非常有用。