The aims of this study were to analyze the effects of different concentrations of epigallocatechin-3-gallate (EGCG) on the primordial follicle survival and development after in vitro culture of ovarian tissue, and to verify the possible involvement of the phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B (PI3K/AKT) pathway in the EGCG actions in the sheep ovary. Ovarian fragments were fixed for histological analysis (fresh control) or cultured in α-minimum essential medium alone (α-MEM+: control medium) or with different concentrations of EGCG (0.01; 0.1; 1; 10 or 100 μg/mL) for 7 days. Inhibition of PI3K activity was performed in fragments cultured with 1 μg/mL EGCG plus LY294002. Thereafter, immunohistochemistry was performed to evaluate the expression of cleaved caspase-3 and AKT phosphorylation (p-AKT). The results showed that 1 μg/mL EGCG maintained the follicular survival similar (P > 0.05) to that of the fresh control and higher (P < 0.05) than that of the α-MEM+ and other EGCG treatments. No difference (P > 0.05) in the follicular activation was observed. However, both follicle and oocyte diameters increased after in vitro culture with 1 μg/mL EGCG compared to other treatments (P < 0.05), except for 10 μg/mL EGCG (P > 0.05). After PI3K inhibition, there was an increase (P < 0.05) of the follicular apoptosis and a reduction of p-AKT immunolocalization. In conclusion, EGCG at 1 μg/mL reduces apoptosis of preantral follicles through the PI3K/AKT pathway after in vitro culture of sheep ovarian tissue.

中文翻译：

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羊卵巢组织体外培养后，表没食子儿茶素-3-没食子酸酯 (EGCG) 通过磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶 B (PI3K/AKT) 信号通路减少窦前卵泡的凋亡

本研究的目的是分析不同浓度的表没食子儿茶素-3-没食子酸酯（EGCG）对卵巢组织体外培养后原始卵泡存活和发育的影响，并验证磷脂酰肌醇-3-激酶的可能参与。 /蛋白激酶 B (PI3K/AKT) 通路在绵羊卵巢中的 EGCG 作用中。将卵巢片段固定用于组织学分析（新鲜对照）或单独在 α-最低必需培养基（α-MEM+：对照培养基）或不同浓度的 EGCG（0.01；0.1；1；10 或 100 μg/mL）中培养 7天。在用 1 μg/mL EGCG 加 LY294002 培养的片段中进行 PI3K 活性的抑制。此后，进行免疫组织化学以评估裂解的 caspase-3 和 AKT 磷酸化 (p-AKT) 的表达。结果表明，1 μg/mL EGCG 维持的卵泡存活率与新鲜对照相似（P > 0.05），并且高于（P < 0.05）α-MEM+和其他 EGCG 处理。未观察到卵泡激活的差异 (P > 0.05)。然而，与其他处理相比，1 μg/mL EGCG 体外培养后卵泡和卵母细胞直径均增加（P < 0.05），但 10 μg/mL EGCG 除外（P > 0.05）。PI3K 抑制后，滤泡凋亡增加（P < 0.05），p-AKT 免疫定位减少。总之，在羊卵巢组织的体外培养后，1 μg/mL EGCG 通过 PI3K/AKT 途径减少了窦前卵泡的凋亡。05) 比 α-MEM+ 和其他 EGCG 处理。未观察到卵泡激活的差异 (P > 0.05)。然而，与其他处理相比，1 μg/mL EGCG 体外培养后卵泡和卵母细胞直径均增加（P < 0.05），但 10 μg/mL EGCG 除外（P > 0.05）。PI3K 抑制后，滤泡凋亡增加（P < 0.05）和 p-AKT 免疫定位减少。总之，在羊卵巢组织的体外培养后，1 μg/mL EGCG 通过 PI3K/AKT 途径减少了窦前卵泡的凋亡。05) 比 α-MEM+ 和其他 EGCG 处理。未观察到卵泡激活的差异 (P > 0.05)。然而，与其他处理相比，1 μg/mL EGCG 体外培养后卵泡和卵母细胞直径均增加（P < 0.05），但 10 μg/mL EGCG 除外（P > 0.05）。PI3K 抑制后，滤泡凋亡增加（P < 0.05）和 p-AKT 免疫定位减少。总之，在羊卵巢组织的体外培养后，1 μg/mL EGCG 通过 PI3K/AKT 途径减少了窦前卵泡的凋亡。PI3K 抑制后，滤泡凋亡增加（P < 0.05）和 p-AKT 免疫定位减少。总之，在羊卵巢组织的体外培养后，1 μg/mL EGCG 通过 PI3K/AKT 途径减少了窦前卵泡的凋亡。PI3K 抑制后，滤泡凋亡增加（P < 0.05），p-AKT 免疫定位减少。总之，在羊卵巢组织的体外培养后，1 μg/mL EGCG 通过 PI3K/AKT 途径减少了窦前卵泡的凋亡。