Long noncoding RNAs (lncRNAs) have been investigated as novel regulatory molecules involved in diverse biological processes. Our previous study demonstrated that lncRNA-ES3 is associated with the high glucose-induced calcification/senescence of human aortic vascular smooth muscle cells (HA-VSMCs). However, the mechanism of lncRNA-ES3 in vascular calcification/aging remained largely unknown. Here, we report that the expression of basic helix-loop-helix family member e40 (Bhlhe40) was decreased significantly in HA-VSMCs treated with high glucose, whereas the expression of basic leucine zipper transcription factor (BATF) was increased. Overexpression of Bhlhe40 and inhibition of BATF alleviated calcification/senescence of HA-VSMCs, as confirmed by Alizarin Red S staining and the presence of senescence-associated β-galactosidase-positive cells. Moreover, we identified that Bhlhe40 regulates lncRNA-ES3 in HA-VSMCs by binding to the promoter region of the lncRNA-ES3 gene (LINC00458). Upregulation or inhibition of lncRNA-ES3 expression significantly promoted or reduced calcification/senescence of HA-VSMCs, respectively. Additionally, we identified that lncRNA-ES3 functions in this process by suppressing the expression of miR-95-5p, miR-6776-5p, miR-3620-5p, and miR-4747-5p. The results demonstrate that lncRNA-ES3 triggers gene silencing of multiple miRNAs by binding to Bhlhe40, leading to calcification/senescence of VSMCs. Our findings suggest that pharmacological interventions targeting lncRNA-ES3 may be therapeutically beneficial in ameliorating vascular calcification/aging.

中文翻译：

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Bhlhe40 抑制 LncRNA-ES3 参与高糖诱导的血管平滑肌细胞钙化/衰老

长链非编码 RNA (lncRNA) 已被研究为参与多种生物过程的新型调控分子。我们之前的研究表明，lncRNA-ES3 与高糖诱导的人主动脉血管平滑肌细胞 (HA-VSMC) 钙化/衰老有关。然而，lncRNA-ES3 在血管钙化/衰老中的机制在很大程度上仍不清楚。在这里，我们报告碱性螺旋-环-螺旋家族成员 e40 (Bhlhe40) 在高糖处理的 HA-VSMC 中的表达显着降低，而碱性亮氨酸拉链转录因子 (BATF) 的表达增加。Bhlhe40 的过表达和 BATF 的抑制减轻了 HA-VSMC 的钙化/衰老，如茜素红 S 染色和衰老相关 β-半乳糖苷酶阳性细胞的存在所证实。此外，我们发现 Bhlhe40 通过与 lncRNA-ES3 基因 (LINC00458) 的启动子区域结合来调节 HA-VSMC 中的 lncRNA-ES3。上调或抑制 lncRNA-ES3 表达分别显着促进或减少 HA-VSMC 的钙化/衰老。此外，我们发现 lncRNA-ES3 通过抑制 miR-95-5p、miR-6776-5p、miR-3620-5p 和 miR-4747-5p 的表达在该过程中起作用。结果表明 lncRNA-ES3 通过与 Bhlhe40 结合触发多种 miRNA 的基因沉默，导致 VSMC 的钙化/衰老。我们的研究结果表明，针对 lncRNA-ES3 的药物干预可能在治疗上有益于改善血管钙化/衰老。我们发现 Bhlhe40 通过与 lncRNA-ES3 基因 (LINC00458) 的启动子区域结合来调节 HA-VSMC 中的 lncRNA-ES3。上调或抑制 lncRNA-ES3 表达分别显着促进或减少 HA-VSMC 的钙化/衰老。此外，我们发现 lncRNA-ES3 通过抑制 miR-95-5p、miR-6776-5p、miR-3620-5p 和 miR-4747-5p 的表达在该过程中起作用。结果表明 lncRNA-ES3 通过与 Bhlhe40 结合触发多种 miRNA 的基因沉默，导致 VSMC 的钙化/衰老。我们的研究结果表明，针对 lncRNA-ES3 的药物干预可能在治疗上有益于改善血管钙化/衰老。我们发现 Bhlhe40 通过与 lncRNA-ES3 基因 (LINC00458) 的启动子区域结合来调节 HA-VSMC 中的 lncRNA-ES3。上调或抑制 lncRNA-ES3 表达分别显着促进或减少 HA-VSMC 的钙化/衰老。此外，我们发现 lncRNA-ES3 通过抑制 miR-95-5p、miR-6776-5p、miR-3620-5p 和 miR-4747-5p 的表达在该过程中起作用。结果表明 lncRNA-ES3 通过与 Bhlhe40 结合触发多种 miRNA 的基因沉默，导致 VSMC 的钙化/衰老。我们的研究结果表明，针对 lncRNA-ES3 的药物干预可能在治疗上有益于改善血管钙化/衰老。lncRNA-ES3 表达的上调或抑制分别显着促进或减少了 HA-VSMC 的钙化/衰老。此外，我们发现 lncRNA-ES3 通过抑制 miR-95-5p、miR-6776-5p、miR-3620-5p 和 miR-4747-5p 的表达在该过程中起作用。结果表明 lncRNA-ES3 通过与 Bhlhe40 结合触发多种 miRNA 的基因沉默，导致 VSMC 的钙化/衰老。我们的研究结果表明，针对 lncRNA-ES3 的药物干预可能在治疗上有益于改善血管钙化/衰老。上调或抑制 lncRNA-ES3 表达分别显着促进或减少 HA-VSMC 的钙化/衰老。此外，我们发现 lncRNA-ES3 通过抑制 miR-95-5p、miR-6776-5p、miR-3620-5p 和 miR-4747-5p 的表达在该过程中起作用。结果表明 lncRNA-ES3 通过与 Bhlhe40 结合触发多种 miRNA 的基因沉默，导致 VSMC 的钙化/衰老。我们的研究结果表明，针对 lncRNA-ES3 的药物干预可能在治疗上有益于改善血管钙化/衰老。结果表明 lncRNA-ES3 通过与 Bhlhe40 结合触发多种 miRNA 的基因沉默，导致 VSMC 的钙化/衰老。我们的研究结果表明，针对 lncRNA-ES3 的药物干预可能在治疗上有益于改善血管钙化/衰老。结果表明 lncRNA-ES3 通过与 Bhlhe40 结合触发多种 miRNA 的基因沉默，导致 VSMC 的钙化/衰老。我们的研究结果表明，针对 lncRNA-ES3 的药物干预可能在治疗上有益于改善血管钙化/衰老。