BACKGROUND C-mannosylation is the one of glycosylations. Microfibril-associated glycoprotein 4 (MFAP4), an important protein for tissue homeostasis and cell adhesion, contains a consensus sequence of C-mannosylation in its fibrinogen C-terminal domain. In this study, we sought to demonstrate that fibrinogen C-terminal domain is a new substrate domain for C-mannosylation. METHODS We established an MFAP4-overexpresssing HT1080 cell line and purified recombinant MFAP4 protein from the conditioned medium for LC-MS/MS analysis. Subcellular localization of MFAP4 was observed under confocal fluorescence microscope. RESULTS We found that MFAP4 is C-mannosylated at Trp235 in the fibrinogen C-terminal domain by LC-MS/MS. To determine the functions of the C-mannosylation of MFAP4, we established a C-mannosylation-defective mutant MFAP4-overexpresssing HT1080 cell line and measured its secretion of MFAP4. The secretion of MFAP4 decreased significantly in the C-mannosylation-defective mutant MFAP4-overexpresssing cell line versus wild-type cells. Moreover, co-transfection experiments indicated that C-mannosylated MFAP4 accelerated its secretion. CONCLUSIONS Our results demonstrate that the fibrinogen C-terminal domain is a novel C-mannosylation domain and that the C-mannosylation of MFAP4 is important for its secretion. GENERAL SIGNIFICANCE These results suggest that C-mannosylation has a role for dominant effect for MFAP4 secretion.

中文翻译：

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纤维蛋白原的C末端结构域很少被C-甘露糖基化，但是其C-甘露糖基化对于微纤维相关糖蛋白4的分泌很重要。

背景技术C-甘露糖基化是糖基化之一。微纤维相关糖蛋白4（MFAP4），一种用于组织动态平衡和细胞粘附的重要蛋白，在其纤维蛋白原C末端结构域中包含一个C-甘露糖基化序列。在这项研究中，我们试图证明纤维蛋白原C末端域是C-甘露糖基化的新底物域。方法我们建立了一个过表达MFAP4的HT1080细胞系，并从条件培养基中纯化了重组MFAP4蛋白用于LC-MS / MS分析。共聚焦荧光显微镜下观察到了MFAP4的亚细胞定位。结果我们发现，通过LC-MS / MS，MFAP4在纤维蛋白原C端结构域的Trp235处被C-甘露糖基化。要确定MFAP4的C-甘露糖基化功能，我们建立了一个过表达HT1080细胞的C-甘露糖基化缺陷型突变MFAP4，并测量了其MFAP4的分泌。与野生型细胞相比，在过表达C-甘露糖基化的突变型MFAP4细胞系中，MFAP4的分泌显着降低。此外，共转染实验表明，C-甘露糖基化的MFAP4促进了其分泌。结论我们的结果证明纤维蛋白原的C末端结构域是一个新的C-甘露糖基化结构域，并且MFAP4的C-甘露糖基化对其分泌至关重要。一般意义这些结果表明，C-甘露糖基化对于MFAP4分泌具有显性作用。此外，共转染实验表明，C-甘露糖基化的MFAP4促进了其分泌。结论我们的结果证明纤维蛋白原的C末端结构域是一个新的C-甘露糖基化结构域，并且MFAP4的C-甘露糖基化对其分泌至关重要。一般意义这些结果表明，C-甘露糖基化对于MFAP4分泌具有显性作用。此外，共转染实验表明，C-甘露糖基化的MFAP4促进了其分泌。结论我们的结果证明纤维蛋白原的C末端结构域是一个新的C-甘露糖基化结构域，并且MFAP4的C-甘露糖基化对其分泌至关重要。一般意义这些结果表明，C-甘露糖基化对于MFAP4分泌具有显性作用。